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CpG甲基化(MBD)DNA捕获试剂盒
CpG甲基化(MBD)DNA捕获试剂盒提供了一种从有限数量的细胞或组织样品中分离CpG甲基化DNA的有效方法。
MethylCollector有许多强大的应用,包括使研究人员快速筛选多个基因座的甲基化状态,可能对分析肿瘤组织或细胞中候选基因的甲基化水平特别有用。它还可以用来检测其他情况下的DNA甲基化变化,包括正常的细胞分化和衰老。
在CpG甲基化(MBD)DNA捕获试剂盒中,His标记的重组MBD2b蛋白特异性地结合通过酶解或超声处理制备的CpG-甲基化的DNA片段。这些蛋白-DNA复合物被镍包覆的磁珠捕获,随后进行洗涤步骤,以去除很少或没有甲基化的片段。由于MBD捕获协议的高效率以及PCR的巨大扩增能力和特异性,特定基因组DNA位点的甲基化状态的分析可以在从少于170个细胞的细胞(约1纳克DNA)中分离的DNA上进行。
CpG甲基化(MBD)DNA捕获试剂盒具有如下优势和特点:
- 检测1ng-1ug片段DNA中的甲基化CpGs
- 使用基于磁珠的方案,在不到3小时内完成
- 使用附带的阳性对照DNA和qPCR引物检查你的结果
- 使用高盐或低盐的结合条件对你感兴趣的区域进行优化
- 使用洗脱的DNA来分析感兴趣的特定基因座或序列来分析全基因组甲基化概况
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:对照PCR引物组的实时PCR分析。MethylCollector MBD捕获是在低盐和高盐条件下使用100纳克Mse I消化的人类男性基因组DNA进行的。洗脱的DNA被纯化并使用实时PCR分析甲基化和非甲基化的启动子。A)使用提供的NBR2 PCR引物混合物与高盐结合条件下的未结合和洗脱馏分的扩增图。NBR2在对照组DNA中是甲基化的,并显示出洗脱馏分的早期扩增。B)在低盐结合条件下,使用提供的Xist PCR引物混合物与未结合和洗脱的馏分的扩增图。Xist在对照组DNA中是甲基化的,在洗脱的馏分中显示早期扩增。C)在高盐结合条件下,使用所提供的GAPDH PCR引物混合物与未结合和洗脱的馏分的扩增图。GAPDH在对照DNA中未被甲基化,在洗脱的馏分中显示出晚期扩增。D) 在低盐结合条件下,使用提供的GAPDH PCR引物混合物与未结合和洗脱的馏分的扩增图。GAPDH在对照DNA中未被甲基化,在洗脱的馏分中显示晚期扩增。
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图2:CpG甲基化(MBD)DNA捕获试剂盒结合反应的富集率。用100ng Mse I消化的人类男性基因组DNA,在高盐和低盐结合条件下进行MBD捕获。对未结合和洗脱的DNA进行清洗并在实时PCR中进行分析。在洗脱的部分中回收的DNA数量除以结合反应中使用的输入DNA数量,得出富集百分比。A)NBR2启动子在高盐条件下的富集。B) Xist启动子在高盐条件下的富集。C) GAPDH启动子在高盐和低盐条件下的富集。对于同一基因座,甲基化的启动子NBR2和Xist与未结合的DNA相比,洗脱的DNA富集超过10倍,而未甲基化的GAPDH启动子几乎只在未结合的部分发现。
产品组分
内容 |
型号 |
规格 |
储存温度 |
CpG甲基化(MBD)DNA捕获试剂盒 | CN55026-01 | 30次 | -20°C |
CpG甲基化(MBD)DNA捕获试剂盒 | CN55026-02 | 60次 | -20°C |
操作手册 |
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注意事项
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