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JMJD2去甲基化酶活性/抑制分析试剂盒(比色法)
组蛋白去甲基化是通过组蛋白去甲基化酶去除改性组蛋白中的甲基。组蛋白去甲基化酶的发现表明,组蛋白甲基化不是一个永久性的修饰,而是一个更加动态的过程。目前研究最多的组蛋白脱甲基酶家族之一是含Jumonji结构域(JmjC)的组蛋白脱甲基酶,其中包括JMJD2。发现JMJD2去甲基化酶具有潜在的致癌功能。检测JMJD2的活性和抑制将对阐明基因激活和沉默的表观遗传调控机制非常重要,并有利于癌症的诊断和治疗。
在该试验中,一个三甲基化的组蛋白H3-K9底物被稳定地涂在微孔板孔上。活跃的JMJD2与底物结合,从底物上去除甲基。JMJD2去甲基化的产物可以用一个特异性抗体识别。去甲基化产物的比例或数量与酶的活性成正比,然后可以通过在450纳米波长的微孔板分光光度计中读取吸光度来比色测量。JMJD2酶的活性又与测量的光密度强度成比例。
JMJD2去甲基化酶活性/抑制分析试剂盒(比色法)是一套完整的优化试剂,设计用于简单快速地比色测量JMJD2的活性或抑制。基于抗体的免疫特异性方法直接检测JMJD2转化的去甲基化产物,而不是副产物,采用96条孔微板格式。
参数对比 | JMJD2去甲基化酶活性/抑制分析试剂盒(比色法) | 其它盒子 |
分析原理 | Immunoaffinity-based end product measurement | Formaldehyde release-based by-product detection |
分析形式 | 96-well microplate | 96-well microplate |
灵敏度 | High; 5 ng (1 nM) of enzyme detection limit | Very low; 10 µg (2 µM) of enzyme detection limit |
S/N Ratio | >20 with very low background | <4 with high background |
受化学试剂的干扰 | None | Affected by various detergents, solvents, and irons |
使用细胞裂解液 | Yes | No |
特异性酶活性定量 | Yes | No |
体内酶抑制实验 | Yes | No |
活性/抑制试验所需的底物数量 |
<0.5 µM per assay point |
50-200 µM per assay point |
抑制剂筛选所需的纯化酶的数量 | 20-50 ng per assay point | 10-20 µg per assay point |
酶抑制测定的准确性 | High (direct detection of changes in amount of end product) | Low (indirect detection of formaldehyde release) |
表1. JMJD2去甲基化酶活性/抑制分析试剂盒(比色法)和一个竞争供应商的试剂盒的比较。竞争者的数据来自供应商的网站或手册。
合作开发的JMJD2去甲基化酶活性/抑制分析试剂盒(比色法)。具有如下的优势和特性:
- 96条孔微孔板格式的3小时比色程序,可用于手工或高通量分析。
- 通过直接检测JMJD2转化的去甲基化产物,而不是副产物,直接测量JMJD2的活性,从而消除了由含硫醇的化学品如DTT、GSH和2-巯基乙醇造成的检测干扰,或由洗涤剂/离子如tween-20、SDS、triton X-100、Fe和Na等造成的干扰。
- 细胞/组织提取物和纯化的JMJD2都可以使用,这样就可以检测JMJD2抑制剂在体内和体外的抑制作用。
- 灵敏度比基于甲醛释放的JMJD2检测高1000倍,允许从低至10纳克的纯化JMJD2酶中比色检测活性。
- 包括去甲基化的H3-K9标准,使JMJD2的特定活性得到量化。
- 准确、可靠、一致,背景信号极低。
产品组分
组分内容 |
型号:A-P-3080-48(48次) |
型号:A-P-3080-96(96次) |
储存温度 |
|
JA1 |
10x Wash Buffer |
14 ml | 28 ml | 4°C |
JA2 | JMJD2 Assay Buffer | 4 ml | 8 ml | 室温 |
JA3 |
JMJD2 Substrate,50ug/ml* |
60 ul | 120 ul | –20°C |
JA4 | JMJD2 Assay Standard,50ug/ml* | 10 ul | 20 ul | –20°C |
JA5 | Capture Antibody,1000ug/ml* | 5 ul | 10 ul | 4°C |
JA6 | Detection Antibody,400ug/ml* | 6 ul | 12 ul | –20°C |
JA7 | Developer Solution | 5 ml | 10 ml | 4°C |
JA8 | Stop Solution | 5 ml | 10 ml | 室温 |
Co-Factor1* | 30 ul | 60 ul | 4°C | |
Co-Factor2* | 30 ul | 60 ul | 4°C | |
Co-Factor3* | 30 ul | 60 ul | 4°C | |
8-Well Assay Strips(With Frame) | 6 | 12 | 4°C | |
|
Adhesive Covering Film |
1 | 1 | 室温 |
操作手册 |
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1 |
1 |
室温 |
文件资源
文件下载 | 文件内容 | 资源说明 |
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A-P-3080-JMJD2去甲基化酶活性/抑制分析试剂盒(比色法) | 操作手册 |
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A-P-3080-JMJD2去甲基化酶活性/抑制分析试剂盒(比色法)相关产品 | 宣传单页 |
注意事项
保存建议 | 推荐蓝冰或冰袋运输。当您收到产品后,按照说明书建议保存各组分。 |
警告 | 本品仅供科研使用,请勿用于临床与诊断。 |
FAQ
Lal S et. al. (November 2017). Heme promotes transcriptional and demethylase activities of Gis1, a member of the histone demethylase JMJD2/KDM4 family. Nucleic Acids Res.
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