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总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒
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总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒

总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒,Global DNA Methylation Assay–LINE-1,非常适合用于筛查不同疾病状态、治疗条件、临床结果或环境因素中5-mC水平的差异。更多视频请关注视频号【艾维缔】。哔哩哔哩【IVDSHOW】。抖音【军哥聊表观】。
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总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒是一种基于 ELISA 的检测方法,用于检测和量化人类基因组 DNA 中的全部DNA甲基化(即 5-甲基胞嘧啶 (5-mC) 水平)。该测定可检测长穿插核苷酸元件 1 (LINE-1) 重复序列的 5-mC 水平。LINE-1 重复序列约占人类基因组的 17-18%,拷贝数约为 50 万。文献已经证实,这些 LINE-1 重复序列的甲基化状态可作为全球 DNA 甲基化的替代指标。

由于在各种人类疾病中都能观察到基因组 DNA 甲基化水平的变化,因此测量全局 DNA 甲基化已成为一种重要的研究方法。LINE-1甲基化异常与癌症等多种疾病的发病和不良预后有关。96孔总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒非常适合用于筛查不同疾病状态、治疗条件、临床结果或环境因素中 5-mC 水平的差异。

在总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒中,首先使用所提供的 MseI 酶对相关基因组 DNA 进行酶解,以产生适当的片段与对应于人类 LINE-1 转座子的生物素化共识序列杂交。LINE-1 探针设计用于检测 LINE-1 重复元件的 290 bp 区域,该区域包含 88 个胞嘧啶残基,其中 12 个位于 CpG 上下文中。杂交样本固定在 96 孔板上,使用 5-甲基胞嘧啶抗体、HRP 结合的二抗和比色检测试剂鉴定甲基化胞嘧啶。使用附带的已知 LINE-1 甲基化水平的 DNA 标准品生成标准曲线,即可得出每个 DNA 样品中 5-甲基胞嘧啶的相对水平。

总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒流程图

总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒具有如下优势和特性:

  • 兼容性: 与细胞或组织提取的人类基因组 DNA 一起使用。
  • 灵敏度 可检测到低至 0.5% 的甲基化。
  • 输入: 可检测 10 纳克输入 DNA 中的 5-mC。
  • 定量: 随附的 DNA 标准品含有已知的 LINE-1 甲基化水平,可用于确定 5-mC 的百分比。
  • 快速简便:基于 ELISA 的简单检测可在 5 小时内完成。

图 1:总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒(全球 DNA 甲基化 - LINE-1 检测试剂盒)显示了用 5-氮杂胞苷处理 HeLa 细胞后 5-mC 水平的变化。使用总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒检测每孔 100 纳克经 MseI 消化的 HeLa 细胞或经 0.05 µM 5-azacytidine 处理的 HeLa 细胞的基因组 DNA。5-azacytidine 是一种已知的 DNA 甲基转移酶(DNMTs)抑制剂,与未处理的 HeLa 细胞相比,用 5-azacytidine 处理细胞会导致全局甲基化下降。使用提供的标准和曲线拟合软件,可以测定每个 DNA 样品中 5-甲基胞嘧啶的百分比。

图 2:总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒生成的标准曲线图。每种 DNA 标准品所代表的 5-甲基胞嘧啶(5-mC)百分比绘制在 x 轴上,标准品(三角形)和样品(圆形)的净 OD 450nm 读数绘制在 y 轴上。使用 Readerfit 软件(https://Readerfit.com)确定最佳曲线拟合值,并根据曲线推断 DNA 样品的 5-mC 百分比值。建议的标准曲线的动态范围可检测到 1% 到 13% 的甲基化百分比,但该检测方法已被证明可检测到低至 0.5% 的甲基化。

图 3:总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒显示了 cfDNA 中 5-mC 含量随年龄的变化。使用的无细胞 DNA (cfDNA) 纯化试剂盒(型号:25503/25504)从 5 毫升血清中提取 cfDNA,并使用 Qubit 荧光仪进行定量。按照总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒的方案,每孔使用 25 纳克 cfDNA,不进行 MseI 消化。利用试剂盒中的甲基化 DNA 标准,以 LINE-1 探针区域中可检测到的 CpG 残基百分比来计算每个样本的 5-mC 百分比。所有样本均一式三份。方框图显示了 25%-75% (▢)、最小-最大值 (Ι)、平均值 (x) 和中位数 (-) 5-mC 百分比。

产品组分

内容

型号

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总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒 CN55017-01 96次 -20°C
总体DNA甲基化(LINE-1)分析试剂盒 CN55017-02 192次 -20°C

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FAQ

A reassessment of the carnivorous status of salmonids: Hepatic glucokinase is expressed in wild fish in Kerguelen Islands
Authors: Mar, undefined and el, Lucie and Gaudin, Philippe and Guéraud, Frančois and Glise, Stéphane and Herman, Alex and re , undefined and Plagnes-Juan, Elisabeth and Véron, Vincent and Panserat, Stéphane and Labonne, Jacques
Journal: Science of The Total Environment (2018): 276--285

A reassessment of the carnivorous status of salmonids: hepatic glucokinase is expressed in wild fish in Kerguelen Islands
Authors: Marandel, Lucie and Gaudin, Philippe and Gu{\'e}raud, Fran{\c{c}}ois and Glise, St{\'e}phane and Herman, Alexandre and Plagnes-Juan, Elisabeth and V{\'e}ron, Vincent and Panserat, St{\'e}phane and Labonne, Jacques
Journal: Science of the Total Environment (2018): 276--285

Overcoming 5-Fu resistance in human non-small cell lung cancer cells by the combination of 5-Fu and cisplatin through the inhibition of glucose metabolism
Authors: Zhao, Jun-gang and Ren, Kai-ming and Tang, Jun
Journal: Tumor Biology (2014): 12305--12315

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