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驱动蛋白生化分析试剂盒
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驱动蛋白生化分析试剂盒

驱动蛋白生化分析试剂盒,Kinesin ELIPA Kit,是一种简单方便的快速测量微管激活的驱动蛋白 ATP 酶活性。更多视频请关注视频号【艾维缔】。哔哩哔哩【IVDSHOW】。抖音【军哥聊表观】。
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真核驱动蛋白能协调细胞内的各种动力学活动。 研究表明,它们能沿着微管轨道移动染色体和囊泡等货物(1)。 它们在细胞骨架结构的组织中也扮演着重要角色,有丝分裂过程中微管纺锤体的建立就是证明(2)。

驱动蛋白利用 ATP 水解的能量沿微管(MT)基质运动。 一旦驱动蛋白马达与其 MT 轨道结合,马达的 ATPase 速率通常会提高几百至几千倍(3)。 MT 激活的驱动蛋白 ATPase 是电机功能的主要参数,也是在各种实验条件下监测和研究驱动蛋白活性的有力方法。

作为Motor Werks(CMW)系列研究试剂的一部分,开发了驱动蛋白 ELIPA™(酶联无机磷酸盐测定法)生化试剂盒。 该检测方法是对 Webb 最初描述的甘油激酶加 D-甘油醛 ATP 酶活性和肌动蛋白激活肌球蛋白 ATP 酶 (4) 检测方法的改良。 该检测方法基于 2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤核糖核苷(MESG)在无机磷酸盐(Pi)存在下催化转化为 2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤时发生的吸光度偏移(330 - 360 nm)。 该反应由嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)催化。 一分子无机磷酸盐将生成一分子 2-氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤,反应基本上是不可逆的 (5)。 因此,360 纳米波长处的吸光度与驱动蛋白 ATP 酶反应生成的 Pi 量成正比。

图 1. 用驱动蛋白生化分析试剂盒测量的微管激活的驱动蛋白 ATPase 活性。测量了部分驱动蛋白马达的 ATPase 活性。ATP 水解的最大 Vmax 从驱动蛋白 HC 的 10,000 nmol ATP/min/mg 到 Chromokinesin 的 470 nmol ATP/min/mg 不等。

驱动蛋白生化分析试剂盒具有如下优势和特点:

  • 微管激活的驱动蛋白 ATP 酶活性的动力学测量
  • 发现驱动蛋白抑制剂
  • 测量驱动蛋白抑制剂的 IC50s

References

  1. Vale, R. D. and Fletterick, R. J. (1997).  The design plan of kinesin motors. Ann. Rev. Cell Dev. Biol. 13: 745-777.
  2. Endow, S. A. (1999).  Microtubule motors in spindle and chromosome motility.  Eur. J. Biochem 262, 12-18.
  3. Johnson, K. A. and Gilbert, S. P. (1995).  Pathway of the microtubule-kinesin ATPase.  Biophys. J. 68, 173-179.
  4. Webb, M. R. (1992). A continuous spectrophotometric assay for inorganic phosphate and for measuring phosphate release kinetics in biological systems.  Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 4884-4887.
  5. Cheng Q., Wang Z-X., and Killilea S. D. (1997). A continuous spectrophotometric assay for protein phosphatases. Anal. Biochem. 226, 68-73.

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驱动蛋白生化分析试剂盒 CNBK060-01 96次 2-8°C
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Author Title Journal Year Article Link
Perdomo, Doranda et al. TbKINX1B: a novel BILBO1 partner and an essential protein in bloodstream form Trypanosoma brucei Parasite 2022 Article Link
Li, Qian Ru et al. AMPK regulates anaphase central spindle length by phosphorylation of KIF4A Journal of Molecular Cell Biology 2018 ISSN 1759-4685
Sheff, Joey G. et al. Novel allosteric pathway of Eg5 regulation identified through multivariate statistical analysis of hydrogen-exchange mass spectrometry (HX-MS) ligand screening data Molecular and Cellular Proteomics 2017 ISSN 1535-9484
Kadakkuzha, Beena M. et al. High-throughput screening for small molecule modulators of motor protein kinesin Assay and Drug Development Technologies 2014 ISSN 1557-8127
Abnous, Khalil et al. Synthesis and molecular modeling of six novel monastrol analogues: Evaluation of cytotoxicity and kinesin inhibitory activity against HeLa cell line DARU, Journal of Pharmaceutical Sciences 2013 ISSN 1560-8115

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