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m6A去甲基化酶活性/抑制分析试剂盒(比色法)
众所周知,在真核生物中,m6A (N6-methyladenosine)是在RNA分子中最常见的和丰富存在的。最近,DNA m6A 同样在真核生物的很多细胞系中被鉴定比如:线虫和果蝇,此外在更高的物种如:植物,小鼠和人类的细胞中也存在。m6A 在DNA的复制,DNA损伤,RNA连接,转座,转录和细胞的防御。在人类细胞中m6A修饰是由m6A催化甲基转移酶复杂METTL3/METTL14和最近发的m6A RNA 去甲基转移酶如FTO和ALKBH5,这种 m6A 的修饰去甲基是以α-ketoglutarate m6A(α-KG)-和Fe2+-方式进行的。 结果表明, 在许多生物过程中,如从生命发展和代谢生育, FTO和ALKBH5和类似于TET酶扮演着重要角色。超过80%的m6A是以RNA 甲基化的形式存在于不同的物种。 m6A主要分布在mRNA和也发生在非编码RNA(ncRNA)如tRNA,rRNA和snRNA。相对丰富的m6A在mRNA转录时已经表明影响核糖核酸代谢过程,如拼接,核出口,翻译能力和稳定性,RNA转录。异常甲基化水平的m6A诱导缺陷甲基化酶和m6A RNA去甲基酶可能导致RNA功能障碍的和疾病发生。例如,异常低水平在正常m6A目标由于增加患者FTO活动、FTO基因突变,通过迄今还未通路,导致了肥胖和相关疾病的发作。动态和可逆化学m6A修饰,m6A在很多癌症中大量的存在于DNA的修饰中。在RNA中也可以作为一种新颖的表观遗传标记的生物学,意义深远可以预见。因此,更多的有用的信息,更好理解m6A RNA甲基化水平和分布对RNA转录、诊断和治疗疾病非常有益。除此之外,在癌细胞的规格,相对于初级的细胞/组织包含有相当低的DNA m6A (<0.001%),我们发现在人类体外细胞(0.03%-0.22%)中m6A修饰的增长以数百倍的速度增加。
在DNA/RNA中m6A甲基化是可逆的
在癌症中m6A的减少常常伴随有m6A的去甲基化酶。我们观测到FTO在急性骨髓性白血病(AM)中存在高表达并且在急性髓细胞白血病(AML)中导致肿瘤的重要角色。因此,确定这种酶的活性对于癌症的诊断和癌症的治疗提供新的靶向提供依据。然而,使用核蛋白和纯化的酶来检测m6A 去甲基化酶活性的工具极少。为了解决这个难题,我们团队再次发力,开发并且提供了 m6A 去甲基化酶活性/抑制分析试剂盒(比色法)。
产品组分
内容 |
型号:A-P-9013-48(48次) |
型号:A-P-9013-96(96次) |
保存条件 |
WB (10X Wash Buffer) |
14 ml |
28 ml |
4°C |
DB (Demethylase Buffer) |
3 ml |
6 ml |
常温 |
MS (10X m6A 底物)* |
10 ul |
20 ul |
–20°C |
BS (Binding Solution) |
5 ml |
10 ml |
常温 |
AS (Assay Standard,2 ug/ml)* |
10 ul |
20 ul |
–20°C |
CA (Capture Antibody,1000X)* |
5 ul |
10 ul |
4°C |
DA (Detection Antibody,1000X)* |
6 ul |
12 ul |
–20°C |
ES (Enhancer Solution)* |
5 ul |
10 ul |
–20°C |
DS (Developer Solution)* |
5 ml |
10 ml |
4°C |
SS (Stop Solution)* |
5 ml |
10 ml |
常温 |
Co-Factor 1* | 30 ul | 60 ul | –20°C |
Co-Factor 2* | 30 ul | 60 ul | –20°C |
Co-Factor 3* | 30 ul | 60 ul | –20°C |
8联管(带框架)* |
6条 |
12条 |
4°C |
使用手册 |
1 |
1 |
常温 |
*在开盖使用之前,为了最大程度的利用产品,需将溶液离心至管底。
文件资源
文件下载 | 文件内容 | 资源说明 |
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A-P-9013-m6A去甲基化酶活性/抑制分析试剂盒(比色法) | 操作手册 |
![]() |
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注意事项
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FAQ
Kuschman HP et. al. (October 2023). Nitric oxide inhibits FTO demethylase activity to regulate N(6)-methyladenosine mRNA methylation. Redox Biol. 67:102928.
Meng F et. al. (October 2023). Chlorogenic Acid Modulates Autophagy by Inhibiting the Activity of ALKBH5 Demethylase, Thereby Ameliorating Hepatic Steatosis. J Agric Food Chem.
Hou L et. al. (November 2022). FTO inhibits oxidative stress by mediating m6A demethylation of Nrf2 to alleviate cerebral ischemia/reperfusion injury. J Physiol Biochem.
Liu Y et. al. (September 2019). <i>N</i> <sup>6</sup>-methyladenosine RNA modification-mediated cellular metabolism rewiring inhibits viral replication. Science. 365(6458):1171-1176.
Janin M et. al. (August 2019). Epigenetic loss of RNA-methyltransferase NSUN5 in glioma targets ribosomes to drive a stress adaptive translational program. Acta Neuropathol.
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