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酶剪切染色质制备试剂盒
染色质免疫沉淀(ChIP)在技术上具有挑战性,并且结果难以解读。我们的酶法染色质免疫沉淀试剂盒通过应用蛋白质G偶联磁珠的简化方案来消除其中的一些挑战,使ChIP只需一天就能完成。试剂盒提供超声或者酶消化两种方案制备染色质。使用我们提供的染色质对照试剂盒和qPCR引物组引物组和已剪切好的染色质来完成您的实验设计,可以在每一步验证您的结果。要了解这些功能与我们提供的其他ChIP试剂盒的差异,请参阅我们的ChIP试剂盒选择指南。
ChIP涉及免疫沉淀经过交联固定的蛋白/DNA复合物。首先,完整的细胞用甲醛固定交联,从而保持蛋白和DNA的相互作用。然后,DNA被剪切成均匀的小片段,使用目标DNA结合蛋白的抗体免疫沉淀DNA/蛋白复合物。免疫沉淀后,DNA经过洗涤,解交联,蛋白被蛋白酶K处理去除。洗脱后的DNA可以用我们的染色体免疫沉淀DNA纯化试剂盒进行纯化,纯化后的DNA可以直接进行qPCR或NGS测序下游分析。
图1:使用酶法染色质免疫沉淀试剂盒示意图可提供高质量的ChIP-Seq数据
使用3µg 我们的AbFlex®组蛋白H3K9ac重组抗体(目录号91103)和的酶法染色质免疫沉淀试剂盒25µg来自K-562细胞的染色质。在ChIP之后,使用下一代DNA文库建库试剂盒(目录号53216和53264)制备Illumina兼容测序文库,并使用NextSeq 500进行测序。结果显示高质量的ChIP-Seq信号峰横跨1号染色体的一个区域。
图2:使用酶法染色质免疫沉淀试剂盒免疫沉淀组蛋白修饰H3K9ac的ChIP-Seq数据 使用酶法染色质免疫沉淀试剂盒富集组蛋白修饰H3K9ac的ChIP qPCR数据
使用3µg 我们的AbFlex®组蛋白修饰H3K9ac重组抗体(货号91103)和酶法染色质免疫沉淀试剂盒免疫沉淀25µg K-562细胞染色质。ChIP后,DNA按1:20稀释,使用我们的人阳性对照引物组ACTB-1和GAPDH-1(货号号71003和71004),人阴性对照引物组1(货号71001)进行qPCR。结果以每1000个细胞检测到的结合情况展示,结果显示阳性对照PCR引物有富集,而阴性对照引物几乎没有富集。
图3:使用酶法染色质免疫沉淀试剂盒免疫沉淀组蛋白修饰H3K9ac的ChIP-qPCR数据
酶法染色质免疫沉淀试剂盒具有如下优势和特性:
- ChIP-IT Express超声法对于难以裂解的细胞、培养细胞和组织样品来说是高质量的染色质片段化方案。
- 如无超声仪,培养细胞系样本只需简单的使用我们的ChIP-IT Express Enzymatic kit。
- 快速的操作步骤使ChIP实验在一天内完成成为可能。
- 蛋白质G磁珠提供低背景富集和简化的洗涤步骤。
产品组分
内容 |
型号 |
规格 |
储存温度 |
酶剪切染色质制备试剂盒 | 53035 | 10次 | -20°C |
操作手册 |
1 | 1 |
常温 |
注意事项
保存建议 | 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后,按照说明书建议保存于-20°C。 |
FAQ
“Polymorphism rs7278468 is associated with Age-related cataract through decreasing transcriptional activity of the CRYAA promoter.” by Ma et al. (2016) Scientific Reports 6(23206).
“Deep sequencing and in silico analyses identify MYB-regulated gene networks and signaling pathways in pancreatic cancer.” by Azim et al. (2016) Sci. Rep. 6(28446).
“Overexpression of IFN-induced protein with tetratricopeptide repeats 3 (IFIT3) in pancreatic cancer: cellular "pseudoinflammation" contributing to an aggressive phenotype.” by Niess et al. (2015) Oncotarget 6(5): 3306-3318.
“Peretinoin, an Acyclic Retinoid, Inhibits Hepatitis B Virus Replication by Suppressing Sphingosine Metabolic Pathway In Vitro.” by Murai et al. (2018) Int J Mol Sci. 19(2): E108.
“LIMD1 is induced by and required for LMP1 signaling, and protects EBV-transformed cells from DNA damage-induced cell death.” by Wang et al. (2018) Oncotarget 9(5): 6282–6297.
“Human Beta Defensin 2 Selectively Inhibits HIV-1 in Highly Permissive CCR6⁺CD4⁺ T Cells.” by Lafferty et al. (2017) Viruses 9(5): E111.
“CCCTC-binding factor recruitment to the early region of the human papillomavirus 18 genome regulates viral oncogene expression.” by Paris et al. (2015) J Virol. 89(9):4770-85.
“Expansion of a novel endogenous retrovirus throughout the pericentromeres of modern humans.” by Zahn et al. (2015) Genome Biol 16:74.
“HIV-1 induced nuclear factor I-B (NF-IB) expression negatively regulates HIV-1 replication through interaction with the long terminal repeat region.” by Vemula et al. (2015) Viruses 7(2):543-58.
“Inflammation-induced miRNA-155 inhibits self-renewal of neural stem cells via suppression of CCAAT/enhancer binding protein β (C/EBPβ) expression.” by Obora et al. (2017) Sci Rep 7:43604.
“BH3 mimetics suppress CXCL12 expression in human malignant peripheral nerve sheath tumor cells.” by Graham et al. (2017) Oncotarget 8(5): 8670–8678.
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