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ARCA Cy5 EGFP mRNA (5-moUTP)
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ARCA Cy5 EGFP mRNA (5-moUTP)

ARCA Cy5 EGFP mRNA (5-moUTP)具备更好性能的5-moUTP修饰mRNA,带有Cy5标记,抑制RNA介导的先天免疫激活,具有稳定高效的表达效率,可进行定位以及实验对照。更多视频请关注视频号【艾维缔】。哔哩哔哩【IVDSHOW】。抖音【军哥聊表观】。
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产品描述
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产品简介

ARCA Cy5 EGFP mRNA (5-moUTP) 可用于分析mRNA的递送和翻译效率。将ARCA Cy5 EGFP mRNA (5-moUTP)转染到细胞后,细胞可表达EGFP(增强型绿色荧光蛋白)。EGFP蛋白是一种常见的报告分子,激发时会发出强烈且明亮的绿色荧光,其最大激发/发射光波长分别为488 nm /509 nm。该mRNA带有荧光染料Cyanine 5(简称Cy5)标记,用一定波长的光激发时可以直接可视化EGFP mRNA,Cy5的最大激发和发射波长分别为650 nm和670 nm。因此Cy5 EGFP mRNA是独立于翻译确定mRNA递送和定位的理想分子。

该产品已经是5’端加帽,3’端加poly(A)尾,以及经过5-moUTP和Cyanine 5-UTP修饰的mRNA。Cyanine 5-UTP与5-moUTP的添加比例是1:3。使用ARCA(抗反向帽类似物,货号B8175)以共转录的方式对mRNA进行加帽,形成了Cap 0结构,增加了mRNA的稳定性和翻译效率[1,2]。修饰核苷酸5-moUTP(也称为5-methoxy-UTP,货号B8061)的添加可以抑制RNA介导的先天免疫激活。Poly(A)尾的添加使mRNA更加稳定并提高mRNA的翻译起始效率[3]。

mRNA转染的优点:
· 无需核吸收——蛋白直接在细胞质中表达
· 其蛋白质表达比DNA转染更快
· 以完全不依赖启动子的方式表达蛋白质
· 没有基因组整合的风险
· 非常适合转染生长缓慢或不分裂的细胞
· 蛋白表达与mRNA的量直接相关
· 瞬时转染:蛋白质的表达在有限的时间内持续,避免了与积累有关的毒性

mRNA Length 996 nucleotides    
Concentration 1 mg/mL
Buffer 1 mM Sodium Citrate, pH 6.4 Storage -40°C or below
General tips 请将其于冰上溶解,并小心防止RNase污染降解。 尽可能避免反复冻融。 不要涡旋震荡。 首次使用时,将其轻柔离心并分成几份,可供单独使用。 使用不含RNase的试剂和耗材,使用适当的无RNase技术。 直至与转染试剂混合,才可加入含有血清的培养基中。
Shipping Condition 干冰运输。

参考文献:

[1] Stepinski J, Waddell C, Stolarski R, et al. Synthesis and properties of mRNAs containing the novel "anti-reverse" cap analogs 7-methyl(3'-O-methyl)GpppG and 7-methyl (3'-deoxy)GpppG. RNA. 2001;7(10):1486–1495.
[2] Jemielity J, Fowler T, Zuberek J, et al. Novel "anti-reverse" cap analogs with superior translational properties. RNA. 2003;9(9):1108–1122.
[3] Gallie DR, Tanguay R. Poly(A) binds to initiation factors and increases cap-dependent translation in vitro. J Biol Chem. 1994;269(25):17166–17173.

引用文献:

1. Chen Q, Gao M, et al. "Biodegradable nanoparticles decorated with different carbohydrates for efficient macrophage-targeted gene therapy." J Control Release. 2020 Apr 22;323:179-190. PMID:32334322

产品组分

组分内容

型号

规格

储存温度

ARCA Cy5 EGFP mRNA (5-moUTP) R1009-01 100 ug(1mg/ml)

-40

ARCA Cy5 EGFP mRNA (5-moUTP) R1009-02 1 mg(1mg/ml) -40
ARCA Cy5 EGFP mRNA (5-moUTP) R1009-03 5 mg(1mg/ml) -40

说明书

1份 1份

室温

*注意:使用各溶液之前,将溶液离心至管底

文件资源

文件下载 文件内容 资源说明
R1009-ARCA Cy5 EGFP mRNA (5-moUTP) 操作手册
R1009-ARCA Cy5 EGFP mRNA (5-moUTP)相关说明 宣传单页

营销中心

注意事项

保存建议 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后,按照说明书建议保存于-20°C。
警告 一般仅供科研使用,请勿用于临床与诊断。

 

FAQ

1. 阳性对照反应

1. 用HyperScribeTM T7 High Yield RNA Synthesis Kit试剂盒转录2μL EGFP对照组模板,不要在转录反应中加入放射性标记的UTP示踪剂。

2. 按照T7 RNA合成试剂盒的中的方法,用DNase I处理转录本。

3. 根据第3部分的方法给转录本加poly(A)尾,但额外加入[α-32P] ATP(任何特异性都可以用);通过跟踪放射性标签,可以更容易地检测出在终反应中有多少ATP结合到poly(A)尾中;记得在向反应混合液加入E-PAP之前吸取留样,作为无酶反应体系(阴性对照)。

4. 通过TCA沉淀法检测结合的带标记的RNA。(成功的加尾反应结合至少50%的放射性标签

5. 取0.5μl的阳性对照反应液及相应的无酶反应液进行电泳(用2.5%的甲醛-琼脂糖凝胶),同时用RNA markers。

加poly(A)尾的产物其电泳条带应该比无酶反应产物的条带大至少150碱基

2. 凝胶中无RNA可见

1. 转录反应的问题

参考T7 RNA合成试剂盒(HyperScribeTM T7 High Yield RNA Synthesis Kit)方法的注意事项。

2. RNase污染

用RNaseZap® Solution处理所有设备及凝胶盒等,并用RNase-free的管子和试剂。

3. 加尾反应后的产物RNA与未加尾的没有可见的大小区别(在凝胶中)

1. 通过阳性对照反应检查试剂盒的组分

验证阳性对照反应结合了至少50%的放射性标记的ATP。

2.如果阳性对照没问题,但实验组的转录本出现问题

凝胶分辨率不足

如果实验组转录本有几Kb大小,琼脂糖凝胶的分辨率可能不足以分辨尺寸的变化。用标签示踪法检测反应(见下部分)

标签示踪法

如果阳性对照反应的产物比无酶反应产物更大,但实验组不是这样,那么就在加尾反应体系中加入示踪标记,通过TCA沉淀法测量结合的标记。

如果结合的标记少于50%, 但放射性标签的掺入大于背景,增加酶的用量或ATP的浓度可能实现理想长度poly (A)加尾的生成。

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