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EZ Cap Firefly Luciferase mRNA (5-moUTP)
产品简介
EZ Cap 萤火虫荧光素酶mRNA(5-moUTP)一旦进入细胞后将表达萤火虫荧光素酶蛋白,它最初从萤火虫Photinus pyralis中提取。该酶ATP依赖性地催化D-荧光素氧化,在约560nm波长下产生化学发光。萤火虫荧光素酶是一种常用的生物发光报告基因,常用于基因调控和功能研究。它适用于mRNA运送, 翻译效率,细胞活力和体内成像等实验。
EZ Cap 萤火虫荧光素酶mRNA(5-moUTP)以1mg / ml的浓度提供。它使用EZ Cap Reagent AG(3'OMe)(货号:B8178)以共转录的方式加帽,以较高效率获得具有Cap 1结构的mRNA。相比于Cap 0结构(ARCA和mCap加帽),带有Cap 1结构的mRNA对于哺乳动物系统更适合,并且具有更高的转录效率。 EZ Cap Reagent AG(3'OMe)获得仅以正确方向插入的能力,导致形成mRNA相较于使用EZ Cap Reagent AG的mRNA具有两倍的翻译效率。添加5-moUTP和poly(A)尾可抑制RNA介导的先天免疫激活,并在体外和体内增强mRNA的稳定性和寿命。 Poly(A)尾在提高翻译起始效率方面也起着重要作用。
产品的所有修饰都旨在模拟完全加工成熟的mRNA。EZ Cap 萤火虫荧光素酶mRNA(5-moUTP)是观察mRNA运送,翻译和其他行为的理想产品。
mRNA Length | 1921 nucleotides | ||
Concentration | 1 mg/mL | ||
Buffer | 1 mM Sodium Citrate, pH 6.4 | Storage | -40°C or below |
General tips | 请将其于冰上溶解,并小心防止RNase污染降解。 尽可能避免反复冻融。 不要涡旋震荡。 首次使用时,将其轻柔离心并分成几份,可供单独使用。 使用不含RNase的试剂和耗材,使用适当的无RNase技术。 直至与转染试剂混合,才可加入含有血清的培养基中。 | ||
Shipping Condition | 干冰运输。 |
产品组分
组分内容 |
型号 |
规格 |
储存温度 |
EZ Cap Firefly Luciferase mRNA (5-moUTP) | R1013-01 | 100 ug(1mg/ml) | -40℃ |
EZ Cap Firefly Luciferase mRNA (5-moUTP) | R1013-02 | 1 mg(1mg/ml) | -40℃ |
EZ Cap Firefly Luciferase mRNA (5-moUTP) | R1013-03 | 5 mg(1mg/ml) | -40℃ |
说明书 |
1份 | 1份 |
室温 |
文件资源
文件下载 | 文件内容 | 资源说明 |
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R1013-EZ Cap Firefly Luciferase mRNA (5-moUTP) | 操作手册 |
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R1013-EZ Cap Firefly Luciferase mRNA (5-moUTP)相关说明 | 宣传单页 |
注意事项
保存建议 | 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后,按照说明书建议保存于-20°C。 |
警告 | 一般仅供科研使用,请勿用于临床与诊断。 |
FAQ
1. 阳性对照反应
1. 用HyperScribeTM T7 High Yield RNA Synthesis Kit试剂盒转录2μL EGFP对照组模板,不要在转录反应中加入放射性标记的UTP示踪剂。
2. 按照T7 RNA合成试剂盒的中的方法,用DNase I处理转录本。
3. 根据第3部分的方法给转录本加poly(A)尾,但额外加入[α-32P] ATP(任何特异性都可以用);通过跟踪放射性标签,可以更容易地检测出在终反应中有多少ATP结合到poly(A)尾中;记得在向反应混合液加入E-PAP之前吸取留样,作为无酶反应体系(阴性对照)。
4. 通过TCA沉淀法检测结合的带标记的RNA。(成功的加尾反应结合至少50%的放射性标签)
5. 取0.5μl的阳性对照反应液及相应的无酶反应液进行电泳(用2.5%的甲醛-琼脂糖凝胶),同时用RNA markers。
(加poly(A)尾的产物其电泳条带应该比无酶反应产物的条带大至少150碱基)
2. 凝胶中无RNA可见
1. 转录反应的问题
参考T7 RNA合成试剂盒(HyperScribeTM T7 High Yield RNA Synthesis Kit)方法的注意事项。
2. RNase污染
用RNaseZap® Solution处理所有设备及凝胶盒等,并用RNase-free的管子和试剂。
3. 加尾反应后的产物RNA与未加尾的没有可见的大小区别(在凝胶中)
1. 通过阳性对照反应检查试剂盒的组分
验证阳性对照反应结合了至少50%的放射性标记的ATP。
2.如果阳性对照没问题,但实验组的转录本出现问题
凝胶分辨率不足
如果实验组转录本有几Kb大小,琼脂糖凝胶的分辨率可能不足以分辨尺寸的变化。用标签示踪法检测反应(见下部分)
标签示踪法
如果阳性对照反应的产物比无酶反应产物更大,但实验组不是这样,那么就在加尾反应体系中加入示踪标记,通过TCA沉淀法测量结合的标记。
如果结合的标记少于50%, 但放射性标签的掺入大于背景,增加酶的用量或ATP的浓度可能实现理想长度poly (A)加尾的生成。
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