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EZ Cap Cas9 mRNA (5-moUTP)
产品简介
Cas9/guide RNA (Cas9/gRNA)系统通常用于基因组编辑。将这些组分递送至细胞核后,RNA引导序列靶向目标位点,并使用Cas9蛋白进行DNA切割。 5moUTP修饰的Cas9 mRNA使用一种共转录加帽方法(CleanCap)进行加帽,以高效率获得天然的Cap 1结构。相比于Cap 0结构,带有Cap 1结构的mRNA对哺乳动物系统更适合,并且具有更高的转录效率。 5moUTP修饰可减少先天免疫反应并增加mRNA活性。
mRNA Length | 4527 nucleotides | ||
Concentration | 1 mg/mL | ||
Buffer | 1 mM Sodium Citrate, pH 6.4 | Storage | -40°C or below |
General tips | 请将其于冰上溶解,并小心防止RNase污染降解。 尽可能避免反复冻融。 不要涡旋震荡。 首次使用时,将其轻柔离心并分成几份,可供单独使用。 使用不含RNase的试剂和耗材,使用适当的无RNase技术。 直至与转染试剂混合,才可加入含有血清的培养基中。 | ||
Shipping Condition | 干冰运输。 |
产品组分
组分内容 |
型号 |
规格 |
储存温度 |
EZ Cap Cas9 mRNA (5-moUTP) | R1015-01 | 100 ug(1mg/ml) | -40℃ |
EZ Cap Cas9 mRNA (5-moUTP) | R1015-02 | 1 mg(1mg/ml) | -40℃ |
EZ Cap Cas9 mRNA (5-moUTP) | R1015-03 | 5 mg(1mg/ml) | -40℃ |
说明书 |
1份 | 1份 |
室温 |
文件资源
文件下载 | 文件内容 | 资源说明 |
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R1015-EZ Cap Cas9 mRNA (5-moUTP) | 操作手册 |
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R1015-EZ Cap Cas9 mRNA (5-moUTP)相关说明 | 宣传单页 |
注意事项
保存建议 | 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后,按照说明书建议保存于-20°C。 |
警告 | 一般仅供科研使用,请勿用于临床与诊断。 |
FAQ
1. 阳性对照反应
1. 用HyperScribeTM T7 High Yield RNA Synthesis Kit试剂盒转录2μL EGFP对照组模板,不要在转录反应中加入放射性标记的UTP示踪剂。
2. 按照T7 RNA合成试剂盒的中的方法,用DNase I处理转录本。
3. 根据第3部分的方法给转录本加poly(A)尾,但额外加入[α-32P] ATP(任何特异性都可以用);通过跟踪放射性标签,可以更容易地检测出在终反应中有多少ATP结合到poly(A)尾中;记得在向反应混合液加入E-PAP之前吸取留样,作为无酶反应体系(阴性对照)。
4. 通过TCA沉淀法检测结合的带标记的RNA。(成功的加尾反应结合至少50%的放射性标签)
5. 取0.5μl的阳性对照反应液及相应的无酶反应液进行电泳(用2.5%的甲醛-琼脂糖凝胶),同时用RNA markers。
(加poly(A)尾的产物其电泳条带应该比无酶反应产物的条带大至少150碱基)
2. 凝胶中无RNA可见
1. 转录反应的问题
参考T7 RNA合成试剂盒(HyperScribeTM T7 High Yield RNA Synthesis Kit)方法的注意事项。
2. RNase污染
用RNaseZap® Solution处理所有设备及凝胶盒等,并用RNase-free的管子和试剂。
3. 加尾反应后的产物RNA与未加尾的没有可见的大小区别(在凝胶中)
1. 通过阳性对照反应检查试剂盒的组分
验证阳性对照反应结合了至少50%的放射性标记的ATP。
2.如果阳性对照没问题,但实验组的转录本出现问题
凝胶分辨率不足
如果实验组转录本有几Kb大小,琼脂糖凝胶的分辨率可能不足以分辨尺寸的变化。用标签示踪法检测反应(见下部分)
标签示踪法
如果阳性对照反应的产物比无酶反应产物更大,但实验组不是这样,那么就在加尾反应体系中加入示踪标记,通过TCA沉淀法测量结合的标记。
如果结合的标记少于50%, 但放射性标签的掺入大于背景,增加酶的用量或ATP的浓度可能实现理想长度poly (A)加尾的生成。
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