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重组PRC2复合体
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重组PRC2复合体

重组PRC2复合体,Recombinant PRC2 complex,非常适合开展酶动力学活性测定、抑制剂筛选和选择性分析实验。更多视频请关注视频号【艾维缔】。哔哩哔哩【IVDSHOW】。抖音【军哥聊表观】。
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PRC2(Polycomb Repressive Complex 2,多聚胞抑制复合体2)是多聚胞群或PcG蛋白(另一个是PRC1)的两类之一,是干细胞特性的重要表观遗传决定因素。在细胞命运决定和分化过程中,它们在基因的长期表观遗传沉默中发挥着重要作用。PRC2 是染色质的抑制因子。PRC2需要定向招募到要沉默的基因组区域的特定DNA序列(称为Polycomb反应元件或PREs)。与染色质结合后,PRC2 亚基 EZH2 具有组蛋白甲基转移酶活性,可催化组蛋白 H3 在赖氨酸 27 处的三甲基化。H3K27me3 是染色质受抑制区域的标志。赖氨酸 27 的三甲基化导致 PRC1 中的含染色质域蛋白结合 H3K27me3,从而招募 PRC1。PRC1 负责细胞分化后的长期基因沉默。

重组 PRC2 复合物包括全长 EZH2、SUZ12、EED 和 RbAp46/48(登录号分别为 NP_001190176.1、NP_056170、NP_003788.2、NP_002884.1 和 NP_005601.1),在 Sf9 中表达,并在 EZH2 的 N 末端含有 FLAG-Tag。表达的 EZH2、SUZ12、EED 和 RbAp46/48 的分子量分别为 87 kDa、83 kDa、50.2 kDa、47.8 kDa 和 47.7 kDa。重组蛋白的 SDS-PAGE 纯度大于 95%。

PRC2 Complex 适用于酶动力学研究、抑制剂筛选和选择性分析。

催化能力:17 次周转/酶分子

HMT 检测条件: 将 3.3 μM H3K27me0 肽与不同浓度的 PRC2 Complex 在反应缓冲液(50 mM TrisCl,pH 8.6,0.02% Triton X-100,2 mM MgCl2,1 mM TCEP,100 μM SAM)中室温孵育 3 小时。活性通过 HTRF 和 MALDI-TOF 检测。

重组 PRC2 复合物凝胶。在 8%的 SDS-PAGE 凝胶上检测 PRC2 复合物,并用考马斯蓝染色。

重组 PRC2 复合物活性测定。将 3.3 μM H3K27me0 肽与 40 nM PRC2 复合物在反应缓冲液(50 mM TrisCl, pH 8.6, 0.02% Triton X-100, 2 mM MgCl2, 1 mM TCEP, 100 μM SAM)中室温孵育 3 小时。

重组 PRC2 复合物活性检测。将 3.3 μM H3K27me0 肽与不同浓度的 PRC2 复合物在反应缓冲液中室温孵育 3 小时。PRC2 复合物用于 HTRF 检测,以确定酶的线性。使用 H3K27me1 特异性抗体检测甲基化肽(H3K27me1)。

产品组分

内容

型号

规格

储存温度

重组PRC2复合体 31387 20ug -80°C
重组PRC2复合体 31887 1mg -80°C

操作手册

1 1

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