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RhoGEF交换分析试剂盒
Ras 超家族小 GTP 酶由 150 多个成员组成,根据其序列同源性可分为几个亚家族,如 Rho、Ras、Ran、Rab、Arf 和 Rem/Rad 家族。这组小 GTP 酶是在 GDP 结合的非活性状态和 GTP 结合的活性状态之间循环的二元开关。 这种开关的调节蛋白包括鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)、GTPase 激活蛋白(GAP)和鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子(GDI)。 GEFs 催化 GDP 与 GTP 的交换,从而使小 GTP 酶在细胞外信号的作用下进入活性状态。为了促进交换,GEFs 必须与 GDP 结合的 GTP 酶结合,破坏 GDP-GTP 酶复合物的稳定性,然后稳定无核苷酸的反应中间体。由于细胞内 GTP 与 GDP 的比例很高,释放的 GDP 会被 GTP 取代,从而导致 GEF 从复合物中释放出来并激活 GTP 酶。许多 GEF 蛋白已被确定为致癌基因,并与癌症等人类疾病有关。有趣的是。最近开发的鸟嘌呤核苷酸荧光类似物大大提高了确定 GEFs 实时交换反应的技术能力,包括动力学和热力学特性,从而无需使用传统的放射性标记方法。这种基于荧光的检测方法利用了鸟嘌呤核苷酸的结合和未结合荧光类似物之间的光谱差异,从而能够监测小型 GTP 酶的核苷酸交换。一旦与 GTP 酶结合,荧光团的发射强度就会急剧增加。因此,在小 GTP 酶和 GEF 的存在下,荧光强度的增强将反映出已知或未知蛋白质各自的 GEF 活性。 我们合作开发了一种基于 N-MAR-GTP 荧光团的 Rho-GEF 检测方法,适用于 96 孔和 384 孔格式。这种检测方法可用于多种研究目的,如表征 GEF 和以高通量筛选形式鉴定 GEF 抑制剂。本试剂盒含有人 Cdc42、Rac1 和 RhoA 蛋白以及作为 Cdc42 和 RhoA GEF 阳性对照的 Dbs 的 GEF 结构域。 Dbs 对 Rac1 的 GEF 活性极低。有趣的是,有报道称人类 Dbs 可以在基于 FRET 的检测中激活 Rac1。该试剂盒包含 Cdc42、Rac1 和 RhoA 蛋白,也可用于任何其他 Ras 超家族 GTP 酶。
图 1. Cdc42、RhoA 和 Rac1 交换试验
图 2. 96 孔半面积板格式中 Cdc42、RhoA 和 Rac1 的 Dbs 交换活性。所示数据为三次实验的平均值。
RhoGEF交换分析试剂盒具有如下优势和特性:
- 确定未表征 GEF 的活性和 GTPase 特异性。
- 小 GTP 酶及其相关 GEF 的生化特征。
- 研究不同辅助因子或蛋白质结构域对 GEF 活性的调节。
- 筛选 GEF 或 GTP 酶的突变蛋白,以确定其活性和底物特异性。
- 以 HTS(高通量筛选)形式鉴定 GEF 抑制剂。如需大量购买本试剂盒中的任何试剂,请咨询我们。
产品组分
内容 |
型号 |
规格 |
储存温度 |
RhoGEF交换分析试剂盒 | BK100 | 1ea | 2-8°C |
操作手册 |
1 | 1 |
常温 |
注意事项
保存建议 | 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后,按照说明书建议保存于-20°C。 |
FAQ
Author | Title | Journal | Year | Article Link |
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