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VHL链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒
与泛素(Ub)共价连接是调节蛋白质稳定性、功能和定位的主要翻译后修饰之一。泛素化是三种酶的协同作用:Ub 激活酶(E1)、Ub 连接酶(E2)和 Ub 连接酶(E3)。泛素化的特异性和效率主要由 E3 酶决定,它通过与 E2∼Ub 共轭物和底物蛋白质结合来指导 Ub 结合级联的最后一步。这一步可确保 Ub 从 E2∼Ub 转移到底物上,从而实现单泛素化或多泛素化。
von Hippel-Lindau 蛋白(VHL)与 Elongins B 和 C、Cullin 2 和 Ring Box Protein 1(Rbx1)相互作用,形成功能性 E3 Ub 连接酶复合物,在其中发挥底物识别实体的作用。VHL 中的大多数肿瘤衍生突变都会损害其底物受体功能和整个 VHL 复合物的 Ub 连接酶活性,从而破坏其肿瘤抑制作用。VHL 复合物不仅针对异源二聚体转录因子缺氧诱导因子(HIF)的α亚基进行泛素化和蛋白酶体降解,而且还参与了与肿瘤生长相关的许多其他生物过程。因此,它是癌症免疫疗法中一个极具吸引力的潜在药物靶点。与大多数 E3 连接酶一样,VHL 复合物也可以泛素化自身。
VHL链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒流程图
VHL链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒是一种灵敏的高通量筛选(HTS)TR-FRET 检测试剂盒,设计用于以 384 反应式的均相格式检测 VHL 自动泛素化活性。它利用铕隐色酸酯标记的 Ub(供体)和 Cy5 标记的 Ub(受体)来完成 TR-FRET 配对。由于 TR-FRET 供体和受体都与 VHL 上形成的多泛素链结合在一起,因此这种基于 FRET 的检测不需要耗时的洗涤步骤,特别适用于 HTS 应用以及多泛素化的实时动力学分析。
通过甲基化的泛素使用VHL链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒测定WHL自动泛素化的抑制作用
UniProt #
UBE1: P22314; UBCH5b: P62837; VHL: P40337; CUL2: Q13617; ELOB: Q15370; ELOC: Q15369; Rbx1: P62877
产品组分
内容 | 型号 | 规格 |
储存温度 |
VHL链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒 | 78305 | 384孔 | -20°C |
操作手册 |
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FAQ
References
1. Dillon, S.C., et al. Genome Biology 2005; 6:227.
2. Morin, R.D., et al. Nat Genet. 2010, 42(2):181.
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