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UBA6-UbcH5b时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒
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UBA6-UbcH5b时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒

UBA6-UbcH5b时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒,Ubi-Trans™ UBA6-UbcH5b TR-FRET Assay Kit,非常适合高通量药物和小分子抑制剂动力学筛选应用。更多视频请关注视频号【艾维缔】。哔哩哔哩【IVDSHOW】。抖音【军哥聊表观】。
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泛素化是一个多步骤过程,涉及 E1(泛素激活酶)、E2(泛素结合酶)和 E3(泛素连接酶)酶。第一步,泛素的 C 端甘氨酸羧基与 E1 酶活性位点的半胱氨酸之间通过 ATP 依赖性反应形成 E1-泛素硫酯键。接着,E1 酶将活化的泛素转移到 E2 酶的半胱氨酸残基上,通过酯交换形成 E2-泛素硫酯连接中间体。最后,E2 酶在 E3 连接酶的帮助下将泛素转移到底物蛋白质上。UBA6(泛素样修饰激活酶 6)是一种激活泛素的 E1 酶,但它也有一个独特之处,即能够作用于 FAT10(又称泛素 D 或人类白细胞抗原-F 邻近转录本 10)。UBA6 在大多数组织中的含量很低,但在树突状细胞成熟和高热应激时会上调。UBA6 可将泛素转移到 UbcH5b(又称泛素结合酶 E2 D2,UBE2D2)上。UbcH5b 在某些癌症类型中过度表达。它能泛素化肿瘤抑制蛋白 p53 和 p62,促进它们的降解。UbcH5b-p62 复合物使三阴性乳腺癌细胞产生抗药性。UbcH5b 还参与了由内吞作用介导的 MHC(主要组织相容性复合体)I 类分子的降解。

UBA6-UbcH5b时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒是一种均质、灵敏的 TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)检测试剂盒,设计用于检测 UBA6(泛素样修饰激活酶 6)依赖性 Ub(泛素)向 UbcH5b(泛素结合酶 E2 D2)E2 酶的转移。它利用铽(Tb)标记的供体和染料标记的链霉亲和素受体完成 TR-FRET 配对。该试剂盒采用方便的 384 孔格式,包含足够 400 个反应使用的纯化 UbcH5b、纯化 UBA6、生物素-泛素、抗-His Tb(铽)标记供体、染料标记链霉亲和素受体和检测缓冲液。

图 1:UBA6-UbcH5b时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒示意图。

在 ATP 存在的情况下,UBE6(E1)将生物素连接的泛素转移到底物 UbcH5b(E2)上。Tb 标记的抗-His 抗体与 His 标记的 E2 连接蛋白结合,而染料标记的链霉亲和素受体与生物素-泛素结合。当泛素被 E1 转移到 E2 酶时,复合物就形成了。在没有泛素化的情况下,复合物不会形成,也不会发生能量转移。当 E2 泛素化时,复合物形成,TR-FRET 配对完成,受体发射增加。因此,TR-FRET 信号与 UBE6 的活性成正比。

TAK243 可抑制 UBA6 依赖性 Ub 向 UbcH5b 转移

UniProt #

UBA6: A0AVT1; UbcH5b: P62837

产品组分

内容 型号 规格

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UBA6-UbcH5b时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒 82216 384孔 -20°C

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82216-UBA6-UbcH5b时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒 操作手册
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FAQ

Saville M.K., et al., 2004 J. Biol. Chem.279(40): 42169-81.
Kim J.H., et al., 2015 BMB Rep. 48(1): 25-29.      
Truongvan N., et al., 2022 Nature Communications 12:4789.

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