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CUL1链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒
与泛素(Ub)共价连接是调节蛋白质稳定性、功能和定位的主要翻译后修饰之一。泛素化是三种酶的协同作用:Ub 激活酶(E1)、Ub 连接酶(E2)和 Ub 连接酶(E3)。泛素化的特异性和效率主要由 E3 酶决定,它通过与 E2∼Ub 共轭物和底物蛋白质结合来指导 Ub 结合级联的最后一步。这一步可确保 Ub 从 E2∼Ub 转移到底物上,从而实现单泛素化或多泛素化。
CUL1 或 Cullin 1 是 E3 连接酶复合物 SCF(SKP1(s-phase kinase associated protein 1)- CUL1- F-box protein)复合物的一部分,该复合物还包括 SKP2 和 RBX1(RING-box protein 1)。SCF 复合物参与作用于细胞周期、信号转导和转录的蛋白质的泛素化,而 CUL1 则充当结构支架。Cullins可用于癌症治疗中的靶向蛋白质降解。
CUL1链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒是一种均一、灵敏的 TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)检测试剂盒,用于检测 CUL1(cullin 1)的自动泛素化。它利用铕标记的泛素(Ub)供体和 Cy5 标记的 Ub 受体来完成 TR-FRET 配对。由于 TR-FRET 供体和受体都结合到了 CUL1 上形成的多泛素链中,因此该检测方法可测定多泛素化。该试剂盒采用方便的 384 孔格式,包含足够 400 个反应使用的纯化 CUL1/SKP1/SKP2/RBX1 复合物、纯化 UBE1(泛素样修饰激活酶 1)、UbcH5b(泛素结合酶 E2 D2)、Ubi-Mix™、ATP 和检测缓冲液。
E1 和 E2 酶、隐酸铕标记的泛素(TR-FRET 供体)和 Cy5 标记的泛素(TR-FRET 受体)与 CUL1 复合物孵育。供体和受体结合到 CUL1 上形成的多泛素链中,从而发生能量转移。TR-FRET 信号与 CUL1 的活性成正比。
图 1:CUL1链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒示意图。
甲基化泛素重组蛋白(MeUbiquitin)对 CUL1 自身泛素化的抑制。
UniProt #
Q8TEB1
产品组分
内容 | 型号 | 规格 |
储存温度 |
CUL1链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒 | 82219 | 384孔 | -20°C |
操作手册 |
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FAQ
References
Sweeney M., et al., 2020 Scientific Reports 10:13942.
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