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自由选择E3链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒
与泛素（Ub）共价连接是调节蛋白质稳定性、功能和定位的主要翻译后修饰之一。泛素化是三种酶的协同作用：Ub 激活酶（E1）、Ub 连接酶（E2）和 Ub 连接酶（E3）。泛素化的特异性和效率由 E3 酶决定，它通过与 E2∼Ub 共轭物和底物蛋白质结合来指导 Ub 结合级联的最后一步。这一步确保 Ub 从 E2∼Ub 转移到底物上，从而实现单泛素化或多泛素化。
自由选择E3链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒是一种灵敏的高通量筛选（HTS）TR-FRET 分析试剂盒，设计用于测量任何纯化的 E3 连接酶在均匀的 384 反应格式中的自动多泛素化。ChoosE3-Freedom 链内 TR-FRET 分析试剂盒包含 E1 和 E2 酶、ATP、优化的 TRF 泛素混合液和通用缓冲液。还提供纯化的 E3 连接酶 MDM2 作为内部质量控制。
该检测方法使用铕标记的泛素供体和Cy5标记的泛素受体来完成TR-FRET配对。由于 TR-FRET 供体和受体都与 E3 连接酶上形成的多泛素链结合在一起，因此该测定只能测量多泛素化，而不能测量单泛素化。这种基于 FRET 的测定无需耗时的洗涤步骤，因此特别适合 HTS 应用和实时动力学分析。
图 1：自由选择E3链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒示意图。
实时分析 MDM2 E3 连接酶活性。阴性对照包括 "无 E2 "和 "无 MDM2 "条件。
UniProt #
UBE1: P22314, UbcH5b: P62837, MDM2: Q00987
产品组分
| 内容 | 型号 | 规格 |
储存温度 |
| 自由选择E3链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒 | CN78560-01 | 384孔 | -80°C |
| 自由选择E3链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒 | CN78560-02 | 768孔 | -80°C |
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操作手册 |
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References
Sweeney M., et al., 2020 Scientific Reports 10:13942.
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