与泛素（Ub）共价连接是调节蛋白质稳定性、功能和定位的主要翻译后修饰之一。泛素化是三种酶的协同作用：Ub 激活酶（E1）、Ub 连接酶（E2）和 Ub 连接酶（E3）。泛素化的特异性和效率主要由 E3 酶决定，它通过与 E2∼Ub 共轭物和底物蛋白质结合来指导 Ub 结合级联的最后一步。这一步确保了 Ub 从 E2∼Ub 转移到底物上，导致其单泛素化或多泛素化。

Cereblon（CRBN）蛋白通过与 DNA 损伤结合蛋白-1（DDB1）、Cullin 4（Cul4A 或 Cul4B）和 Cullins 1 的调节因子（RoC1）相互作用，形成功能性 E3 Ub 连接酶复合物。在这个复合体中，Cereblon 作为底物受体，介导靶蛋白的泛素化和随后的蛋白酶体降解。Cereblon 复合物参与许多生物过程，包括细胞增殖和凋亡。因此，它被用于治疗癌症的靶向蛋白质降解。与大多数 E3 连接酶一样，大脑龙复合体自身也会泛素化，这种自动泛素化促进了它的 Ub 连接酶活性。

Cereblon 链内 TR-FRET 分析试剂盒是一种灵敏的高通量筛选（HTS）TR-FRET 分析试剂盒，设计用于在 384 反应式中测量 小脑(Cereblon) 的自动泛素化活性。它利用铕隐色酸酯标记的 Ub（供体）和 Cy5 标记的 Ub（受体）来完成 TR-FRET 配对。由于 TR-FRET 供体和受体都与脑龙上形成的多泛素链结合在一起，这种基于 FRET 的检测无需耗时的洗涤步骤，因此特别适用于 HTS 应用以及多泛素化的实时动力学分析。

图 1：小脑链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒示意图。    

甲基化泛素对 小脑复合物 自身泛素化的抑制。

UniProt #

Cereblon:Q96SW2; DDB1: Q16531; Cul4a: Q13619; Rbx1: P62877