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CBL-B驱动Tyro3泛素化链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒
与泛素(Ub)共价连接是调节蛋白质稳定性、功能和定位的主要翻译后修饰。泛素化是三种酶的协同作用:Ub 激活酶(E1)、Ub 连接酶(E2)和 Ub 连接酶(E3)。泛素化的特异性和效率主要由 E3 酶决定,它通过与 E2∼Ub 共轭物和底物蛋白质结合来指导 Ub 结合级联的最后一步。这一步确保 Ub 从 E2∼Ub 转移到底物上,导致其单泛素化或多泛素化。
卡西塔斯 B 线淋巴瘤原癌基因-b(CBL-B)是一种 RING 型 E3 连接酶,是 T 细胞活化以及生长因子受体和非受体酪氨酸激酶信号传导的负调控因子。它包含一个 N 端酪氨酸激酶结合(TKB)结构域,该结构域由一个四螺旋束、一个钙结合 EF-手和一个 Src 同源(SH2)结构域组成,其后是一个连接螺旋区和 RING 结构域,负责催化功能。此外,CBL-B 还含有与酪氨酸和丝氨酸磷酸化位点相关的富脯氨酸区域,以及用于二聚化的泛素相关(UBA)/亮氨酸拉链结构域。CBL-B 与大量与细胞增殖、分化和细胞形态控制有关的靶蛋白相互作用。CBL-B 的泛素连接酶活性通过酪氨酸(Tyr)363 的磷酸化而上调,酪氨酸(Tyr)363 位于 TKB 和 RING 结构域之间的螺旋连接区。Tyr363 的磷酸化使 CBL-B 从其自动抑制确认中打开,允许 E2 和底物与 CBL-B 结合。例如,CBL-B 被受体型酪氨酸激酶 Tyro3 磷酸化,而 Tyro3 在体外和体内也是 CBL-B 泛素化的底物。
CBL-B驱动Tyro3泛素化链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒是一种灵敏的高通量筛选(HTS)TR-FRET 分析试剂盒,设计用于以 384 反应格式测量 CBL-B E3 连接酶的活性。它利用铕标记的泛素(供体)和 Cy5 标记的泛素(受体)来完成 TR-FRET 配对。由于 TR-FRET 供体和受体都与多泛素链结合在一起,这种基于 FRET 的检测无需耗时的洗涤步骤,因此特别适用于 HTS 应用以及多泛素化的实时动力学分析。值得注意的是,该检测试剂盒不能检测单泛素化。
图 1:CBL-B驱动Tyro3泛素化链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒示意图。
CBL-B 驱动的 Tyro3 泛素化抑制。
UniProt #
CBL-B: Q13191; TYRO-3: Q06418
产品组分
内容 | 型号 | 规格 |
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CBL-B驱动Tyro3泛素化链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒 | 78388 | 384孔 | -20°C |
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