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C-CBL驱动Tyro3泛素化链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒
与泛素(Ub)共价连接是调节蛋白质稳定性、功能和定位的主要翻译后修饰之一。泛素化是三种酶的协同作用:Ub 激活酶(E1)、Ub 连接酶(E2)和 Ub 连接酶(E3)。泛素化的特异性和效率主要由 E3 酶决定,它通过与 E2∼Ub 共轭物和底物蛋白质结合来指导 Ub 结合级联的最后一步。这一步确保 Ub 从 E2∼Ub 转移到底物上,导致其单泛素化或多泛素化。
卡西塔斯 B 系淋巴瘤(C-CBL)是一种 RING 型 E3 连接酶,也是 CBL 蛋白家族的成员,该家族由三个同源物组成。它包含一个 N 端酪氨酸激酶结合(TKB)结构域,该结构域由一个四螺旋束、一个钙结合 EF-手和一个 Src 同源(SH2)结构域组成,其后是一个连接螺旋区和负责催化功能的 RING 结构域。此外,C-CBL 还含有富脯氨酸区和几个酪氨酸磷酸化位点,可与各种靶标结合,还含有一个泛素相关(UBA)结构域,用于泛素结合和二聚化。C-CBL 与大量与细胞存活、迁移和增殖有关的靶蛋白相互作用。C-CBL 的泛素连接酶活性受酪氨酸(Tyr)371 磷酸化的上调,酪氨酸(Tyr)371 位于 TKB 和 RING 结构域之间的螺旋连接区。Tyr371 的磷酸化可使 C-CBL 从其自动抑制构象中释放出来,从而与 E2 和底物结合。C-CBL 可被 Tyro3 等受体型酪氨酸激酶磷酸化,Tyro3 也可作为 C-CBL 介导的泛素化的底物。
C-CBL驱动的Tyro3泛素化链内TR-FRET检测试剂盒是一种灵敏的高通量筛选(HTS)TR-FRET检测试剂盒,设计用于在均相384反应式中检测C-CBL E3连接酶的活性。它利用隐色酸铕标记的 Ub(供体)和 Cy5 标记的 Ub(受体)来完成 TR-FRET 配对。由于 TR-FRET 供体和受体都与多泛素链结合,这种基于 FRET 的检测无需耗时的洗涤步骤,因此特别适用于高通量应用以及多泛素化的实时分析。值得注意的是,该检测试剂盒不能检测单泛素化。
图 1:C-CBL驱动Tyro3泛素化链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒示意图。
抑制 C-CBL 驱动的 Tyro3 泛素化作用。
UniProt #
C-CBL: P22681; TYRO-3: Q06418
产品组分
内容 | 型号 | 规格 |
储存温度 |
C-CBL驱动Tyro3泛素化链内时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)分析试剂盒 | 78408 | 384孔 | -20°C |
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