磷酸标签丙烯酰胺是一种创新的磷酸结合标签和功能分子，能够在中性pH（生理pH）条件下特异性结合磷酸离子，常用于分析蛋白的磷酸化水平。这个双环金属络合物（1,3-bis[bis(pyridin-2-ylmethyl) amino]propan-2-olato dizinc(II) complex）具有卓越的选择性，可以在中性 pH 的水溶液中，与苯基磷酸酯二价阴离子（PH-OPO32-）形成稳定的结合，其 K_d 值为 25 nM（在 Zn²⁺ 存在的情况下）。Phos-tag 提供了一种独特的电泳分析技术，称为锰 (II)- Phos-tag SDS-PAGE，可用于同时分析蛋白的磷酸化和非磷酸化形式。

磷酸标签丙烯酰胺结构和分离原理

磷酸标签丙烯酰胺实验数据展示

分离原理：

1. 电泳中的磷酸化蛋白捕获2个二价金属离子。

2. 磷酸化水平越高电泳速度越慢。

3. 根据磷酸化水平进行分离。（即使磷酸化位点的数目相同，但只要位置不同就能分离）。

产品应用：

磷酸标签丙烯酰胺：可以广泛应用于研究领域：

蛋白磷酸化分析：用于鉴定和分析蛋白质的磷酸化状态，揭示信号传导通路的活性。

生物医学研究：在生物标本中检测蛋白质的磷酸化，有助于了解疾病机制。

药物筛选：用于筛选和评估针对磷酸化事件的药物候选物。

注意事项：

电泳后，电转之前，需要使用螯合剂（EDTA）从凝胶中除去锰离子（Mn²⁺）。此步骤可提高磷酸化和非磷酸化蛋白转移到 PVDF 膜上的转移效率。

  1）电泳后，将凝胶在含有 1〜10 mmol/L EDTA 的普通转移缓冲液中浸泡至少 10 分钟，同时轻轻摇动。（10 分钟×1〜3 次）。

※根据凝胶厚度等调整 EDTA 缓冲液的处理时间和温度（例如：1.5 mm 厚：处理 20 分钟×两次）。

※除了转移缓冲液外，还可以使用 1×电泳缓冲液。

2）接下来，将凝胶在不含 EDTA 的普通转移缓冲液中浸泡 10 分钟，同时轻轻摇动（10 分钟×1 次）。

※强烈推荐使用湿法以实现蛋白从 Mn²⁺

- 磷酸标签丙烯酰胺凝胶到PVDF膜的有效转移。（也可以使用半干法）

※对于 Phos-tag 凝胶中的磷酸化目的蛋白，必须对印迹条件（如时间和温度）进行优化。