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m6A RNA甲基化定量检测试剂盒(荧光法)
众所周知,在真核生物中,m6A (N6-methyladenosine)是在RNA分子中最常见的和丰富存在的。这种修饰是由m6A催化甲基转移酶复杂METTL3和最近发的m6A RNA 去甲基转移酶如FTO和ALKBH5,这种 m6A RNA去甲基是以α-ketoglutarate m6A(α-KG)-和Fe2+-方式进行的。 结果表明, 在许多生物过程中,如从生命发展和代谢生育,METTL3,FTO和ALKBH5扮演着重要角色。超过80%的m6A是以RNA 甲基化的形式存在于不同的物种。 m6A主要分布在mRNA和也发生在非编码RNA(ncRNA)如tRNA,rRNA和snRNA。相对丰富的m6A在mRNA转录时已经表明影响核糖核酸代谢过程,如拼接,核出口,翻译能力和稳定性,RNA转录。异常甲基化水平的m6A诱导缺陷甲基化酶和m6A RNA去甲基酶可能导致RNA功能障碍的和疾病发生。例如,异常低水平在正常m6A目标由于增加患者FTO活动、FTO基因突变,通过迄今还未通路,导致了肥胖和相关疾病的发作。动态和可逆化学m6A修饰,在RNA中也可以作为一种新颖的表观遗传标记的生物学,意义深远可以预见。因此,更多的有用的信息,更好理解m6A RNA甲基化水平和分布对RNA转录、诊断和治疗疾病非常有益。 该产品中,总RNA必将结合在微孔板上,使用一种高特异性的RNA溶液方案。使用特异性较强的捕获抗体和检测抗体来分析m6A。检测产生的增强信号,然后通过读取在微型板分光光度计波长为450 nm处吸光度进行比色定量。m6A的数量与测量的OD值强度是成正比的。在这个试剂盒中包括阳性和阴性对照。绘制标准曲线 (范围:0.02到1 ng的m6A)或单点对照的m6A可以用作阳性对照。因为m6A的含量,在不同的组织,正常和病变的部位,或在处理过以及未处理的条件下,我们建议运行2份样品,以确保信号生成的可信心性。这套解决方案将允许研究人员选择定量一个绝对数量的m6A或确定相对m6A RNA甲基化状态的两个不同的RNA样品。 该款产品拥有一套完整的优化缓冲液和试剂体系,可以采用比色或荧光法来定量总RNA中的 m6A (N6-methyladenosine)。对于总RNA(从哺乳动物,各种组织或细胞样本如像培养瓶和培养皿培养的细胞,新鲜和冷冻的组织,石蜡包埋组织,血液,体液,植物,真菌,细菌和病毒等任何样本中提取的) 中m6A直接定量检测甲基化状态是非常理想的。
在mRNA中m6A甲基化是可逆的(文献1)
m6A RNA甲基化定量检测试剂盒(荧光法) 具有以下优势和特点:
- 类似于Elisa步骤的荧光法检测方便快速。整个操作步骤可在3小时50分钟完成。
- 高敏,检测的最低下限为 5 pg 的 m6A 。
- 独特的结合液容许>70 nts 的RNA紧紧的结合在孔上,可以定量检测来自mRNA和ncRNA如tRNA,rRNA和snRNA。
- 优化的抗体和增强剂溶液可以特异的定量检测m6A,对于特定片段腺苷浓度范围的未甲基化样本RNA不会产生交叉反应。
- 包括的阴性和阳性对照,对于来自任何种属的m6A都可以实现定量检测。
- 96孔可拆卸板模式使研究人员能根据自己需要选择手工或是高通量模式分析。
- 操作简便、可信、分析条件始终如一。
产品组分
组分内容 |
型号:A-P-9008-48(48次) |
型号:A-P-9008-96(96次) |
储存温度 |
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WB |
10X Wash Buffer |
14 ml |
28 ml |
4°C |
BS |
Binding Solution |
5 ml | 10 ml | 室温 |
NC |
Negative Control,0% 5-mC,100ug/ml * |
10 ul |
20 ul |
-20°C |
PC |
Positive Control,m6A,2ug/ml * |
10 ul |
20 ul |
-20°C |
CA |
Capature Antibody,1000X* |
5 ul | 10 ul | 4°C |
DA |
Detection Antibody,1000X* |
6 ul | 12 ul | -20°C |
ES |
Enhancer Solution |
5 ul | 10 ul | -20°C |
FD | Fluoro Developer* | 8 ul | 16 ul | -20°C |
FE |
Fluoro Enhancer |
8 ml | 16 ml | 4°C |
DB |
Dilution Buffer |
4 ml |
8 ml |
室温 |
8-联管 |
8-Well Assay Strips(With Frame) |
6 |
12 |
4°C |
操作手册 |
|
1 |
1 |
室温 |
文件资源
文件下载 | 文件内容 | 资源说明 |
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A-P-9008-m6A RNA甲基化定量检测试剂盒(荧光法) | 操作手册 |
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A-P-9008-m6A RNA甲基化定量检测试剂盒(荧光法)相关说明 | 宣传单页 |
注意事项
保存建议 | 推荐蓝冰或冰袋运输。当您收到产品后,按照说明书建议保存各组分。 |
警告 | 本品仅供科研使用,请勿用于临床与诊断。 |
FAQ
Zheng Y et. al. (October 2022). LncNAP1L6 activates MMP pathway by stabilizing the m6A-modified NAP1L2 to promote malignant progression in prostate cancer. Cancer Gene Ther.
Wu et. al. (September 2021). Comprehensive Analysis of m5C RNA Methylation Regulator Genes in Clear Cell Renal Cell Carcinoma Int'l Journal of Genomics. 2021
Zeng M et. al. (August 2020). Critical roles of mRNA m<sup>6</sup>A modification and YTHDC2 expression for meiotic initiation and progression in female germ cells. Gene. 753:144810.
Wu C et. al. (August 2020). Interplay of m<sup>6</sup>A and H3K27 trimethylation restrains inflammation during bacterial infection. Sci Adv. 6(34):eaba0647.
Zhang C et. al. (June 2019). Reduced m6A modification predicts malignant phenotypes and augmented Wnt/PI3K-Akt signaling in gastric cancer. Cancer Med.
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