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泛素是一种小的（约8.6千道尔顿）多肽，它可以通过其C端与靶蛋白上赖氨酸残基的氨基结合。这种结合被称为单泛素化。额外的泛素部分可以利用泛素中存在的七个赖氨酸残基中的任何一个与最初的泛素结合。这些泛素链的形成被称为多泛素化。最具特征的多泛素化是通过泛素第48位的赖氨酸形成链（K48连接链）。单泛素化已被证明可以改变靶蛋白的定位、活性和/或功能。多泛素化最常见的后果是蛋白酶体介导的靶蛋白降解。泛素与靶蛋白的结合需要三种不同酶的协同作用，即E1（泛素激活酶）、E2（泛素结合酶）和E3（泛素连接酶），从而在泛素的C端与靶蛋白上赖氨酸残基的ε - 氨基之间形成异肽键。泛素E3连接酶作为支架蛋白，为泛素结合酶（E2）和靶底物提供对接位点。通常，E3连接酶介导泛素从E2硫酯中间体转移到与底物蛋白的酰胺连接（Hershko和Ciechanover，1998）。除了底物的泛素化，E3连接酶还可以自身 “自泛素化”。这一特性用于体外测定以监测E3连接酶的活性。这种基于凝胶的体外泛素化试剂盒设计得简单、快速且易于使用。E3连接酶测定使用荧光标记的泛素 - Alexa647进行，并在SDS - PAGE上分离，使研究人员能够直接观察和量化凝胶，节省了宝贵的时间和试剂。该测定试剂盒避免了更费力且耗时的基于蛋白质免疫印迹的E3测定方法。
这种基于凝胶的体外泛素化试剂盒设计得简单又快速。E3连接酶检测使用荧光标记的泛素-Alexa647进行，并在SDS-PAGE上分离，使研究人员能够直接观察和量化凝胶，节省了宝贵的时间和试剂。该检测试剂盒避免了基于蛋白质免疫印迹法的E3检测中更为繁琐耗时的步骤。
凝胶可定制体外E3连接酶活性检测试剂盒(Alexa647)具有如下优势和特性：
- 检测E3连接酶的自泛素化活性。
- 测试不同的E2，以确定适合您的E3连接酶的最佳E2组合。
- 测试化合物对E3活性的抑制或激活作用。
- 无需转膜和抗体检测，即可直接在凝胶中可视化泛素及其结合物，从而节省时间和试剂。
- 通过减少实验步骤的数量来避免引入变异性。
- 使用该试剂盒作为正交检测方法，以确认高通量筛选实验的结果。
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产品组分
组分内容
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凝胶可定制体外E3连接酶活性检测试剂盒(Alexa647)
UC201 1ea 室温 操作手册 1
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