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我们的线粒体膜电位近红外检测试剂盒(适合流式细胞)是一套用于监测细胞活力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。这款特定的试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位的丧失来监测细胞凋亡。线粒体膜电位的崩溃与线粒体通透性转换孔的开放同时发生，导致细胞色素C释放到细胞质中，进而引发细胞凋亡级联反应中的其他下游事件。我们的线粒体膜电位近红外检测试剂盒(适合流式细胞)提供了所有必要的组件以及优化的检测方法，用于检测线粒体膜电位丧失的细胞中的细胞凋亡。这种荧光检测方法基于我们专有的阳离子型MitoLite NIR™染料对细胞中线粒体膜电位的检测。在正常细胞中，MitoLite NIR™主要在线粒体中积累，然而，在凋亡细胞中，MitoLite NIR™的染色强度会降低。用MitoLite NIR™染色的细胞可以通过流式细胞术，使用红色激发光和远红色发射光（FL4通道）进行观察。该试剂盒可与其他试剂搭配使用，如蓝色激发的碘化丙啶和Cell Meter™磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒（#22831），用于细胞活力和凋亡的多参数研究。该试剂盒针对通过流式细胞术筛选细胞凋亡激活剂和抑制剂进行了优化。
产品优势
1.高特异性：依赖于线粒体膜电位（ΔΨm）选择性积聚在活性线粒体中
2.细胞兼容性：适用于增殖细胞、非增殖细胞，兼容悬浮细胞和贴壁细胞的检测。
3.稳定性好：抗光漂白能力强，适合长时间活细胞成像
4.高信噪比：和其他染料相比，信噪比更高，成像更清晰
样品实验方案
简要概述
1.将待测化合物处理的细胞调整至5×10⁵~1×10⁶ cells/mL密度
2.每1 mL细胞悬液加入5 μL 200× MitoLite™ NIR母液，轻轻涡旋混匀
3. 37℃、5% CO₂培养箱中避光孵育15-30分钟
4.离心细胞，并将细胞重悬于1 mL生长培养基中
5.使用流式细胞仪通过FL4通道（激发635nm，发射670nm）分析细胞
注：本方案适用于大多数哺乳动物细胞系，具体条件需根据细胞类型优化
操作步骤
1.使用预温培养基或自选缓冲液将细胞重悬至5×10⁵~1×10⁶ cells/mL。
注：最佳密度需根据细胞系单独优化
2.加入待测化合物诱导细胞凋亡，并建立平行对照实验。
阴性对照：仅加入化合物溶剂
阳性对照：将细胞置于 37 °C、5% CO2 培养箱中，用 5-50 µM FCCP 或 CCCP 处理 15 至 30 分钟。
注意：CCCP 或 FCCP 可与 MitoLite™ NIR 同时添加。建议通过预实验确定各细胞系合适的浓度
3.将 5 µL 200X MitoLite™ NIR（组分 A）添加到处理过的细胞中。
4.将细胞置于 37 °C、5% CO2 培养箱中孵育 15 至 30 分钟。
注意：对于贴壁细胞，用 0.5 mM EDTA 轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与 MitoLite™ NIR 染料上样溶液孵育前，用含血清的培养基清洗一次。
5. 1000 rpm离心4分钟，使用1 mL Assay Buffer（组分B）或自选缓冲液重悬细胞。
6.使用流式细胞仪通过FL4通道（激发635nm，发射670nm）分析细胞。
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产品组分
组分内容
型号
规格
储存温度
线粒体膜电位近红外检测试剂盒(适合流式细胞)
22802 100次 室温 操作手册 1
1
常温
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营销中心
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注意事项
保存建议 推荐蓝冰或冰袋运输。当您收到产品后，按照说明书建议保存各组分。 -
FAQ
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Safranine O as a fluorescent probe for mitochondrial membrane potential studied on the single particle level and in suspension
Authors: Perevoshchikova IV, Sorochkina AI, Zorov DB, Antonenko YN.
Journal: Biochemistry (Mosc) (2009): 663Determination of high mitochondrial membrane potential in spermatozoa loaded with the mitochondrial probe 5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimidazolyl-carbocyanine iodide (JC-1) by using fluorescence-activated flow cytometry
Authors: Guthrie HD, Welch GR.
Journal: Methods Mol Biol (2008): 89The mitochondrial membrane potential and Ca2+ oscillations in smooth muscle
Authors: Chalmers S, McCarron JG.
Journal: J Cell Sci (2008): 75Computer-assisted live cell analysis of mitochondrial membrane potential, morphology and calcium handling
Authors: Koopman WJ, Distelmaier F, Esseling JJ, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Methods (2008): 304How DASPMI reveals mitochondrial membrane potential: fluorescence decay kinetics and steady-state anisotropy in living cells
Authors: Ramadass R, Bereiter-Hahn J.
Journal: Biophys J (2008): 4068
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