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对大多数真核 mRNA 而言,只有 5´ 末端带有 7-甲基鸟苷 (m7G) 帽结构,且 3′ 末端带有 poly(A) 尾,才能有效翻译。HiScribe T7 mRNA 合成试剂盒(含 CleanCap Reagent AG)优化了 RNA 合成配方,利用三核苷酸帽类似物技术,通过一步共转录加帽即可获得带有天然 Cap-1 结构的 mRNA,且不会影响 RNA 产量。使用含 T7 启动子序列、AG 起始的目标序列和 poly(A) 尾编码序列的 DNA 模板,即可转录带有 5´-m7G Cap-1 结构和多聚腺苷酸的 mRNA,该 mRNA 能够有效翻译并能逃避细胞先天免疫应答。
HiScribe T7 mRNA 合成试剂盒(含 CleanCap Reagent AG)包含独立管装的 NTP 和 CleanCap Reagent AG,适用于全部/部分修饰 NTP 替换;试剂盒总产量为 1.8 mg mRNA。使用该试剂盒合成的 Cap-1 mRNA 适用于多种应用,包括转染、显微注射、体外翻译、临床前 mRNA 治疗研究以及 RNA 结构和功能分析。
该试剂盒提供的试剂足够进行 20 次反应(20 µl 反应体系/次)。使用 1 µg CLuc AG 对照模板 DNA 时,单次标准反应获得 ≥ 90 µg 的 RNA 产物。每个试剂盒可产生 ≥ 1.8 mg 的 RNA 产物。
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需要但不提供的材料
DNA 模板:
必须是包含 T7 RNA 聚合酶启动子和 AG 起始的目标序列的线性 DNA 模板,且相对于待转录靶标序列的方向正确。经修饰的 NTP:
生物素、荧光素、地高辛、氨基烷基、假尿嘧啶-5—三磷酸盐 NTP 等。通用:
热循环仪、微型离心机、无核酸酶水、无核酸酶的离心管和吸头纯化:
酚、氯仿、乙醇、3 M 乙酸钠溶液(pH 5.2)或醋酸铵、Monarch® RNA 纯化试剂盒(500 µg;T2050)、RNA 定量设备及试剂凝胶分析:
凝胶、电泳缓冲液、上样染料、核酸 ladder、凝胶装置、电源
T7 mRNA合成试剂盒(含帽AG)具有如下优势和特性:
- 可一步完成共转录加帽操作,简化实验流程
- CleanCap® Reagent AG 三核苷酸帽技术可产生天然的 Cap-1 结构,极大地提高翻译效率,尽力降低合成 mRNA 的免疫应答
- 加帽效率高(带帽产物1 > 95%)
- 经优化设计,mRNA 产量高
- 适用于全部/部分修饰核苷酸替换
- 1最终加帽效率取决于 CleanCap Reagent、DNA 模板和最终的 mRNA 序列。因 RNA 长度和碱基组成而产生的二级结构也会影响最终加帽效率。
关键词:- T7 mRNA合成试剂盒(含帽AG)
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产品组分
内容 型号
规格 储存温度
T7 mRNA合成试剂盒(含帽AG) E2080-01 20次 -20°C
T7 mRNA合成试剂盒(含帽AG) E2080-02 80次 -20°C
操作手册
1 1 常温
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注意事项
保存建议 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后,按照说明书建议保存于-20°C。 -
FAQ
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