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未折叠蛋白反应通过提高BMI1水平使KAT2B泛素化，从而抑制KAT2B/MLKL介导的肝细胞坏死性凋亡

发布时间：

2026-09-13 20:41

研究文章

黄小刚，熊志，邱荣贤，谢雪梅，郑锋锋，陈飞华，胡振挺*

未折叠蛋白反应通过提高BMI1水平使KAT2B泛素化，从而抑制KAT2B/MLKL介导的肝细胞坏死性凋亡

https://doi.org/10.1515/med-2023-0718

于2022年8月10日收到；2023年4月25日接收

摘要:未折叠蛋白反应(UPR)在许多肝脏疾病的发病机制中起重要作用。BMI1具有肝脏保护作用，但其是否通过UPR参与肝细胞死亡的调控尚不清楚。在此，通过用衣霉素(TM， )诱导肝细胞系(MIHA)建立内质网应激模型。使用细胞计数试剂盒-8检测和流式细胞术评估肝细胞的活力和凋亡。通过蛋白质免疫印迹法测定BMI1、KAT2B以及与UPR相关的蛋白(p-eIF2α、eIF2α、ATF4和ATF6)、NF-κB(p65和p-p65)、凋亡(裂解的caspase-3、bcl-2和bax)和坏死性凋亡(p-MLKL和MLKL)的表达水平。通过免疫共沉淀和泛素化检测确定KAT2B与BMI1之间的关系。结果表明，TM不仅促进肝细胞中的UPR、凋亡和坏死性凋亡，还上调BMI1和KAT2B的表达水平并激活NF-κB通路。BAY-117082逆转了TM对活力、凋亡、NF- 通路和BMI1的影响，但增强了TM对KAT2B/MLKL介导的坏死性凋亡的影响。BMI1促进KAT2B的泛素化，BMI1过表达逆转了TM对活力、凋亡和KAT2B/MLKL介导的坏死性凋亡的影响。总之，

BMI1的过表达促进KAT2B的泛素化，从而阻断MLKL介导的肝细胞坏死性凋亡。

关键词:肝细胞；坏死性凋亡；未折叠蛋白反应；B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点-1；KAT2B

1 引言

肝脏是人体最大的生物代谢器官，肝细胞是维持肝脏功能和形态的主要细胞。由于解剖位置和功能的特殊性，肝脏易受病毒、外源性物质和内源性代谢产物的影响，导致肝细胞受损，这是各种肝脏病变的共同病理生理基础，也是肝功能障碍的主要原因[1,2]。先前的一项研究发现，肝细胞的不可逆损伤会导致肝细胞死亡，包括凋亡和坏死性凋亡，这是肝病进展中的关键事件[3]。因此，提高肝细胞的抗损伤能力、减少肝细胞死亡并促进损伤修复是减轻和预防肝衰竭的重要策略。

累积证据表明，内质网(ER)应激在许多肝脏疾病的发病机制中起到重要作用[4]。内质网是蛋白质和脂质合成的关键细胞器。当内质网的稳态受到干扰时，错误折叠的蛋白质会积累，导致内质网应激[5]。内质网应激会触发未折叠蛋白反应(UPR)以恢复内质网稳态[6]。UPR可以通过激活转录因子6(ATF6)和磷酸化真核翻译起始因子2α(eIF2α)来阻止内质网中的蛋白质合成并促进蛋白质降解，从而促进细胞存活[7]。田等人报道，eIF2α的磷酸化减轻了急性肝损伤中的内质网应激和肝细胞坏死性凋亡[8]。然而，UPR减少肝细胞死亡的更多机制仍有待阐明。

#这些作者对这项工作贡献相同。

* *通讯作者:胡振亭，莆田学院附属医院感染科，福建省莆田市城厢区东圳东路999号，351100，中国，电子邮件:huzhenting_hhz@163.com，电话:+86 - 0594 - 2293910

黄小龙、何雄志、邱荣贤、谢雪梅、郑峰峰、陈飞华:莆田学院附属医院感染科，福建省莆田市，351100

在我们的初步研究中，我们发现UPR上调了肝细胞中B细胞特异性莫洛尼MLV插入位点1(BMI1)的蛋白表达，这可能与UPR诱导的NF - 途径的激活有关[9]，因为该途径已被证明可上调BMI1水平[10]。BMI1是一种关键的转录抑制剂，在造血发育过程中调节基因表达[11]。此外，先前的一项研究报道，BMI1的缺失会导致肝损伤，因此BMI可能在肝脏保护中发挥作用[12]。此外，通过生物信息学分析，我们预测BMI1是赖氨酸乙酰转移酶2B(KAT2B)的泛素化修饰蛋白。KAT2B已被证明介导混合谱系激酶结构域样假激酶(MLKL)依赖性坏死性凋亡[13]。然而，尚不清楚UPR保护肝细胞的机制是否与KAT2B/MLKL介导的坏死性凋亡的调节有关。为此，本研究探讨了内质网应激期间UPR介导的BMI1上调与KAT2B/MLKL介导的坏死性凋亡之间的关系。

2 材料与方法

2.1细胞培养

人正常肝细胞MIHA(CL0469；中国丰汇生物)在补充有10%胎牛血清(FBS，IMC - 101；Immocell)和青霉素 - 链霉素溶液(IMC - 601；Immocell)的RPMI - 1640培养基(IMC - 202；中国Immocell)终于在含有的湿润空气中培养。

2.2生物信息学分析

KAT2B和BMI1之间的相互作用是通过ubibrowser(http://ubibrowser.ncpsb.org.cn)预测的。

2.3转染

BMI1过表达质粒(oe-BMI1，F105834)及其阴性对照(NC，pcDNA3.1-3xFlag)购自中国优宝生物。BMI1特异性短发夹 RNA(shBMI1，靶序列:ATTGATGCCACAACCATAATA)和空载体(shNC)由中国VectorBuilder订购。为了实现转染，将转染试剂(L3000150；美国赛默飞世尔科技公司)和质粒或shRNA分别用Opti-MEM(11058021；美国赛默飞世尔科技公司)稀释，混合，然后加入细胞中进行孵育。在之后，对细胞进行定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)以验证转染效率。

2.4分组

本研究分为三个部分。在第一部分中，细胞用衣霉素(TM，，HY-A0098；MedChemExpress，中国)处理0、12、24和小时，然后，通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞活力[14]。选择小时的TM处理用于后续实验，以评估TM对MIHA细胞的影响。在第二部分中，细胞先用NF- 抑制剂BAY-117082 (HY-13453；MedChemExpress)预处理小时，然后接受TM 处理0、12、24和小时，随后通过CCK-8测量细胞活力[15]。在后续实验中，细胞先用BAY-117082预处理小时，然后用TM处理小时。在第三部分中，用oe-BMI1、NC、shNC或shBMI1转染的细胞进一步用TM 处理0、12、24和小时，然后通过CCK-8测试其活力。在后续实验中，转染的细胞接受小时的TM处理。

2.5 细胞活力

使用CCK-8试剂盒(K1018，Apexbio，中国)评估经处理的MIHA细胞的活力。简要地说，将细胞接种到96孔板中(每孔 )。孵育后，以不同方式处理细胞不同时间，然后与CCK-8试剂反应。最后，用酶标仪(CMaxPlus，MD，中国)检测处的吸光度。

2.6 蛋白质免疫印迹法

用RIPA裂解缓冲液(YT612；北京博奥森生物技术有限公司，中国)制备全细胞裂解物。通过BCA试剂盒(BTN80815；北京博奥森生物技术有限公司)对总蛋白进行定量，将其加载到SDS - PAGE电泳中，随后转移到硝酸纤维素膜(P2110；北京雅格贝生物科技有限公司，中国)上。之后，用5%脱脂牛奶封闭非特异性结合，将膜与一抗在下孵育过夜，并在室温下用二抗(表1)进行检测。甘油醛 - 3 - 磷酸脱氢酶(GAPDH)用作内参。最后，通过ECL试剂(CW0048；北京康为世纪生物科技有限公司，中国)检测免疫反应，并在ChemiDoc™ XRS plus成像系统(伯乐公司，美国)中进行可视化。

2.7细胞凋亡

使用Annexin V-FITC/PI试剂盒(abs5001；absin，中国)分析凋亡细胞。简而言之，将处理后的MIHA细胞轻轻悬浮于结合缓冲液中，制备浓度为细胞的细胞悬液。此后，依次向细胞悬液中加入Annexin V-FITC和碘化丙啶，反应。最后，通过流式细胞仪(NL-3000；CYTEK，美国)检测凋亡细胞。

2.8定量逆转录聚合酶链反应

使用RNA提取试剂(19201ES60；翌圣，中国)从MIHA细胞中分离总RNA。然后，使用cDNA合成试剂盒(11119ES60；翌圣)将分离的RNA逆转录为cDNA。随后，在实时PCR系统(ABI 7300；美国ABI公司)中使用SYBR Green qPCR Mix(11198ES03；翌圣)进行qPCR。引物序列如下:BMI1正向:5’-AGATCGGGGCGAGACAATG-3’，反向:5’-TTTTATTC TGCGGGGCTGGG-3’；GAPDH正向:5’-GTCTCCTCTGA CTTCAACAGCG-3’，反向:5’-ACCACCCTGTTGCTGTAG CCAA-3’。使用方法[16]将表达值标准化为GAPDH。

2.9 免疫共沉淀(co-IP)

BMI1和KAT2B之间的相互作用通过免疫共沉淀试剂盒(Bes3011；百司诺生物，中国)进行验证。简要地说，细胞裂解物在RIPA缓冲液中制备，并在下离心以获得上清液。一部分上清液用作输入，其余用于免疫沉淀。然后将蛋白质与抗KAT2B抗体(表1)或抗IgG抗体(在免疫共沉淀试剂盒中)孵育过夜。此后，蛋白质通过蛋白A/G磁珠进行免疫沉淀，沉淀的蛋白质进行蛋白质印迹检测。

2.10泛素化检测

如前所述[17]，使用泛素化检测试剂盒(BK161；美国Cytoskeleton公司)测定KAT2B的泛素化水平。简而言之，用 MG132(HY-13259；MedChemExpress公司)处理转染了shNC或shBMI1的细胞，然后用裂解缓冲液裂解。随后，将裂解物与泛素化亲和珠悬液孵育。珠子用洗涤缓冲液洗涤，样品被洗脱。随后使用指定抗体进行标准的蛋白质印迹程序。

表1:本研究中使用的抗体

名称	目录编号	Molecular weight (kDa)	稀释度	制造商
p-eIF2α	#3398	38	1/1,000	美国Cell Signaling Technology公司
eIF2α	#5324	38	1/1,000	美国Cell Signaling Technology公司
ATF4	ab184909	50	1/1,000	Abcam, UK
ATF6	ab122897	75	1/1,000	Abcam, UK
P65	ab32536	65	1/1,000	Abcam, UK
p-p65	ab76302	65	1/1,000	Abcam, UK
BMI1	ab126783	40	1/10,000	Abcam, UK
KAT2B	ab12188	93	1/1,000	Abcam, UK
p-MLKL	ab187091	54	1/1,000	Abcam, UK
MLKL	ab184718	54	1/1,000	Abcam, UK
Bcl-2	ab32124	26	1/1,000	Abcam, UK
Bax	ab32503	21	1/1,000	Abcam, UK
Cleaved caspase-3	ab32042	17	1/500	Abcam, UK
GAPDH	ab8245	36	1/10,000	Abcam, UK
Goat anti-rabbit	ab205718	-	1/2,000	Abcam, UK
Goat anti-mouse	ab205719	-	1/2,000	Abcam, UK

2.11 统计分析

测量数据以均值标准差表示。多组间比较采用单因素方差分析，随后进行事后检验 Bonferroni检验。两组间比较采用独立样本检验。所有统计分析均使用Graphpad 8.0软件(美国加利福尼亚)进行，值小于0.05被认为具有统计学意义。

3 结果

3.1 曲古抑菌素A诱导MIHA细胞凋亡和坏死性凋亡

在TM处理12、24和小时后，细胞活力显著降低(图1a， )。为了进一步评估TM对MIHA细胞的影响，MIHA细胞接受TM处理小时。我们通过蛋白质印迹检测了TM处理对MIHA细胞中UPR相关蛋白表达水平的影响，结果表明TM增加了p-eIF2α/eIF2α的比例以及ATF4和ATF6的蛋白水平(图1b - d， )。此外，TM提高了MIHA细胞的凋亡率(图1e和f， )。接下来，我们发现TM还促进了MIHA细胞中p-p65/p65和p-MLKL/MLKL的比例，并上调了BMI1和KAT2B的蛋白表达水平(图 )。这些证据表明，TM可以促进MIHA细胞中NF-KB途径和KAT2B/MLKL途径的激活，并上调BMI1的表达。

图1:衣霉素诱导MIHA细胞凋亡和坏死性凋亡。(a) 0、12、24及时，CCK-8法检测衣霉素处理对MIHA活力的影响。(b-d) WB检测衣霉素 (5 ) 处理后MIHA中p-eIF2α、eIF2α、ATF4及ATF6蛋白水平。(e, f) 流式细胞术测定衣霉素 (5 ) 处理后的细胞凋亡。(g-i) WB检测衣霉素 (5 ) 处理后MIHA中p65、p-p65及BMI1蛋白水平。(j-l) WB检测衣霉素 (5微克/毫升) 处理后MIHA中KAT2B、p-MLKL及MLKL蛋白水平。GAPDH为内参。* ** *** vs. 对照。数据为至少三次独立实验均值 SD。缩写:TM=衣霉素；CCK-8=细胞计数试剂盒-8；GAPDH=甘油醛-3-磷酸脱氢酶。

3.2 NF-κB抑制剂可阻断TM诱导的细胞凋亡，但增强TM诱导的坏死性凋亡

为验证TM对MIHA细胞的调控是否与NF- 信号通路有关，先用NF- 抑制剂BAY-117082预处理MIHA细胞，再用TM处理。结果显示，单独使用BAY-117082对细胞活力和凋亡无显著影响，但它部分逆转了TM对细胞活力和凋亡的调控(图2a - c， )。此外，BAY-117082降低了p-p65/p65比值和BMI1蛋白水平，也逆转了TM对p-p65/p65比值和BMI1蛋白表达的调控(图2d - f， )。有趣的是，BAY-117082对KAT2B表达水平和p-MLKL/MLKL比值无显著影响，但增强了TM对KAT2B表达水平和p-MLKL/MLKL比值的促进作用(图 )。

3.3 BMI1过表达逆转了TM对细胞凋亡和坏死性凋亡的影响

为了确定TM对MIHA细胞的作用是否与BMI1相关，我们在MIHA细胞中过表达和沉默了BMI1。根据qRT-PCR的检测结果，shBMI1在shBMI1、shBMI1#2和shBMI1#3中呈现出最明显的转染效率(图3a， )。此外，发现oe-BMI1逆转了TM对MIHA细胞活力和凋亡的影响，而shBMI1进一步增强了TM对细胞活力或凋亡的抑制或促进作用 (图3b - d， )。此外，oe-BMI1进一步增强了TM诱导的BMI1蛋白水平升高，但shBMI1使其逆转(图4a和b， )。此外，oe-BMI1也逆转了TM调节的KAT2B蛋白水平和p-MLKL/MLKL比值，但shBMI1使其增强(图4c - e， )。通过检测凋亡相关蛋白，我们发现TM抑制了Bcl-2的表达，但增加了Bax和裂解的caspase-3的水平(图和， )。同样，oe-BMI1也消除了TM对凋亡相关蛋白的影响，而shBMI1使其增强(图和 )。

3.4 MLKL基因敲低逆转了TM对细胞凋亡和坏死性凋亡的影响

为研究MLKL在BMI1/KAT2B相关坏死性凋亡中是否起主导作用，我们在MIHA细胞中进行了shMLKL转染和TM处理。此外，通过qRT-PCR验证了shMLKL最显著的转染效率(图5a， )。值得注意的是，MLKL基因敲低逆转了TM对MIHA细胞活力(图5b， )和凋亡(图5c和d， )的影响。然而，MLKL基因敲低并不影响TM对KAT2B蛋白水平的作用，但降低了p-MLKL/MLKL比值(图6a - c， )。此外，我们发现TM抑制了Bcl-2的表达，但促进了Bax和裂解的caspase-3的表达水平(图6d和e， )。同样，TM对凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和裂解的caspase-3)的影响也被MLKL基因敲低所中和(图6d和e， )。

3.5 BMI1影响MIHA细胞中KAT2B的泛素化

KAT2B与BMI1之间的相互作用通过ubibrowser进行预测(图7a)，随后通过免疫共沉淀实验得到证实(图7b)。此外，蛋白质印迹结果显示，oe-BMI1抑制了KAT2B的蛋白表达(图7c和d， )。在用蛋白酶抑制剂MG132处理后，发现oe-BMI1对KAT2B的抑制作用被阻断(图7c和d)。此外，BMI1沉默增加了KAT2B的表达水平，但降低了KAT2B的泛素化水平，而BMI1过表达则产生相反的结果(图7e和f， )。因此，BMI1影响MIHA细胞中KAT2B的泛素化。

图2:衣霉素经NF-κB途径诱导MIHA细胞凋亡和坏死性凋亡。实验分四组:对照组正常培养；BAY-117082组(10μM)处理1h；衣霉素组(5μg/ml)处理不同时间；联合组先以BAY-117082(10μM)预处理1h，再予衣霉素(5μg/ml)处理不同时间。(a)CCK-8法检测0、12、24、48h后细胞活力。(b, c)流式细胞术分析凋亡。(d-f)Western blot检测p65、p-p65及BMI1蛋白水平。(g-i)Western blot检测KAT2B、p-MLKL及MLKL蛋白水平。GAPDH为内参。“ ， vs 对照。” ， vs BAY-117082。* ### vs 衣霉素组。数据为至少三次独立实验均值 SD。缩写:GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶；CCK-8，细胞计数试剂盒-8。

4 讨论

本研究揭示，肝细胞中未折叠蛋白反应(UPR)通过上调BMI1介导KAT2B泛素化，从而阻断MLKL介导的坏死性凋亡以保护肝细胞。

衣霉素(TM)是一种天然核苷抗生素，它可以阻碍内质网中新蛋白质的糖基化修饰并介导细胞凋亡。多项研究通过衣霉素在肝细胞中诱导内质网应激[18,19]。正如先前的一项研究所表明的，衣霉素诱导的内质网应激会导致肝细胞活力下降和凋亡增加[20]。此外，衣霉素可以上调肝细胞中与未折叠蛋白反应和坏死性凋亡相关的蛋白质表达水平[21]。与先前的研究一致，我们发现衣霉素不仅促进了肝细胞中的未折叠蛋白反应、凋亡和坏死性凋亡，还上调了BMI1和KAT2B的表达水平并激活了核因子κB(NF-κB)信号通路。

图3:BMI1过表达逆转衣霉素对MIHA细胞活力及凋亡的影响。(a) qRT-PCR检测BMI1过表达质粒、shBMI1、shBMI1#2和shBMI1#3转染效率，以GAPDH为内参。(b-d) MIHA细胞经阴性对照、BMI1过表达质粒、shBMI1或阴性对照转染后，用衣霉素(5 μg/ml)处理不同时间。(b) 0、12、24和48小时CCK-8法检测细胞活力。(c, d) 流式细胞术分析细胞凋亡。 vs. 阴性对照。 vs. 对照。、、 vs. 转阴性对照。 vs. 衣霉素+阴性对照 P<0.001。、、 vs. 衣霉素+转阴性对照。数据表示为至少三次独立实验的平均值 SD。ShBMI1:BMI1特异性短发夹RNA；NC:阴性对照；GAPDH:甘油醛-3-磷酸脱氢酶；TM:衣霉素；CCK-8:细胞计数试剂盒-8；qRT-PCR:定量逆转录聚合酶链反应。

TM诱导的NF- 信号通路激活是由于未折叠蛋白反应(UPR)和NF-信号通路之间的串扰。UPR由IRE1、ATF6和PERK协同介导。此外，已发现活化的IRE1、活化的PERK和eIF2 磷酸化可激活NF- [22]。NF- 可通过上调JNK通路中蛋白质的转录和活性或通过促进炎症介质的表达水平来促进内质网应激[23,24]。傅等人提出，通过抑制NF- 信号可有效降低糖尿病心肌病细胞中的内质网应激[25]。在此，我们报道抑制NF- 信号不仅有效逆转了TM对MIHA细胞活力和凋亡的调节，还逆转了TM对BMI1的调节，表明BMI1表达的增加与TM诱导的NF- 激活有关，这也与先前的报道[10]类似。有趣的是，我们发现抑制NF- 信号促进了TM对KAT2B和p-MLKL的调节，这表明阻断NF- B可促进肝细胞坏死性凋亡。这实际上并不新颖，因为先前发表的一项研究已经阐明，抑制NF- 可导致角质形成细胞中RIPK1介导的坏死性凋亡[26]。由于抑制BMI1会促进坏死性凋亡的发生，因此阻断NF- B诱导的肝细胞坏死性凋亡可能与阻断NF- B诱导的BMI1抑制有关[27]。

图4:BMI1过表达逆转TM对MIHA细胞KAT2B/MLKL及凋亡蛋白的影响。MIHA细胞转染NC、BMI1过表达质粒、shBMI1或shNC，经TM(5μg/ml)处理48h。(a-e)WB检测BMI1、KAT2B、p-MLKL和MLKL水平。(f-g)WB检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3。GAPDH为内参。 vs对照组。 vs TM+NC。 vs TM+shNC。数据为≥3次独立实验均值 SD。缩写:ShBMI1，BMI1特异性shRNA；NC，阴性对照；GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶；TM，衣霉素。

现有研究表明，BMI1有助于维持正常干细胞和癌细胞的自我更新特性[27,28]。此外，BMI1是肝祖细胞扩增的重要基因[29]，这表明BMI1对肝脏的自我更新也具有重要意义。通过功能丧失和功能获得实验，我们发现过表达BMI1抑制了TM诱导的MIHA细胞凋亡和坏死性凋亡，而敲低BMI1则相反，这表明BMI1是调节MIHA细胞凋亡和坏死性凋亡的关键基因。这一结论也得到了现有研究的支持。例如，BMI1可通过调节氧化应激和线粒体功能来抑制凋亡并促进听觉毛细胞的存活[30]。袁等人指出，BMI1的上调可抑制裂解的半胱天冬酶-3的表达，但促进Bcl-2的表达，从而抑制肝细胞凋亡并降低肝脏脂毒性[31]。巴拉比诺等人发现，BMI1的缺失可导致小鼠视网膜坏死性凋亡，从而影响视网膜发育[32]。这些证据共同表明，BMI1通过抑制凋亡和坏死性凋亡来保护肝细胞免受内质网应激。

图5:敲低MLKL逆转衣霉素对MIHA细胞活力和凋亡的影响。(a) qRT-PCR检测shMLKL、shMLKL#2和shMLKL#3转染效率，以GAPDH为内参。(b) CCK-8法测定处理后0、12、24和48小时MIHA细胞活力。(c, d) 流式细胞术分析处理后MIHA细胞凋亡。 vs shNC, P<0.001。* 、、 vs 对照。、 vs TM+shNC。数据表示为至少三次独立实验的平均值 SD。MLKL:混合谱系激酶结构域样假激酶；ShMLKL:MLKL特异性短发夹RNA；shNC:阴性对照；GAPDH:甘油醛-3-磷酸脱氢酶；TM:衣霉素；CCK-8:细胞计数试剂盒-8；qRT-PCR:定量逆转录聚合酶链反应。

图6:敲低MLKL可逆转衣霉素对MIHA细胞凋亡相关蛋白的影响。(a - c) 通过蛋白质印迹法测定处理后的MIHA细胞中KAT2B、磷酸化MLKL和MLKL的蛋白水平。(d - e) 通过蛋白质印迹法测定凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和裂解的半胱天冬酶-3)的表达水平。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶作为内参。与对照相比。与衣霉素 + shNC相比。定量值表示为至少三个独立实验的平均值标准差。ShMLKL:MLKL特异性短发夹RNA。NC:阴性对照。GAPDH:甘油醛-3-磷酸脱氢酶。TM:衣霉素。

本研究还阐明了BMI1与KAT2B之间的相互作用。具体而言，BMI1促进了KAT2B的泛素化。值得注意的是，BMI1与催化性的RING2/RING1b亚基结合形成功能性E3泛素连接酶，通过蛋白酶体降解途径促进蛋白质降解[33,34]。尽管尚无关于BMI1对KAT2B进行泛素化的研究，但已证实KAT2B可被UBE2D2泛素化[35]。由于KAT2B能够介导MLKL依赖性坏死性凋亡，BMI1可能通过促进KAT2B的泛素化来抑制MIHA细胞中的坏死性凋亡，这与过表达BMI1逆转衣霉素对KAT2B和磷酸化MLKL的促进作用的结果一致。值得注意的是，衣霉素诱导MIHA细胞中BMI1和KAT2B的增加与BMI1对KAT2B泛素化的影响并不矛盾。先前的研究报道，KAT2B有助于维持细胞中有效的未折叠蛋白反应水平[36]。因此，在衣霉素诱导的肝细胞中，BMI1对KAT2B的泛素化调控不足以抵消其他途径对KAT2B表达的促进作用。因此，促进BMI1的表达可能有助于改善衣霉素诱导的内质网应激。

尽管本研究阐明了未折叠蛋白反应对肝细胞死亡的潜在机制，但仍存在局限性，即仅使用了人正常肝细胞系。此外，目前的体外研究结果未来需要在适当的动物实验中进一步验证。

图7:BMI1介导KAT2B泛素化。(a)ubibrowser预测KAT2B与BMI1相互作用。R，环状结构域；C，C末端SOCS盒；SO，其他单结构域；F，F盒；D，DWD盒。红边宽度反映互作可信度。(b)Co-IP验证KAT2B与BMI1互作。(c, d)MIHA细胞转染阴性对照或BMI1过表达质粒，经 MG132处理4h，WB检测KAT2B蛋白水平。(e, f)MIHA细胞转染shRNA阴性对照或shRNA干扰BMI1。24h后检测KAT2B泛素化水平。 vs 阴性对照； vs shRNA阴性对照。GAPDH为内参。

5结论

本研究表明，未折叠蛋白反应(UPR)激活NF - 途径以促进BMI1表达，这导致KAT2B泛素化，从而阻断混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)介导的坏死性凋亡。本研究结果为控制肝脏疾病的潜在分子机制提供了新的见解。致谢:不适用。

资金信息:本研究得到福建省中青年教师教育科研项目[JAT200510]的支持。

作者贡献:对概念和设计有重大贡献:黄小龙和何雄志；

数据采集、数据分析和解释:邱荣贤、谢雪梅、郑峰峰、陈飞华和胡振廷；撰写文章或对重要知识内容进行批判性修订:黄小龙；最终批准发表版本:所有作者；同意对工作的所有方面负责，以确保与工作的准确性或完整性相关的问题得到适当调查和解决:黄小龙、何雄志、邱荣贤、谢雪梅、郑峰峰、陈飞华和胡振廷。

利益冲突:作者声明无利益冲突。

数据可用性声明:在当前研究期间生成的数据集可应合理要求从相应作者处获得。

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MIHA,人肝细胞,衣霉素,内质网,NF‑κB,泛素化,肝损伤

无

TUSC3的表观遗传激活使胶质母细胞瘤对替莫唑胺敏感，与MGMT启动子甲基化状态无关

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TUSC3的表观遗传激活使胶质母细胞瘤对替莫唑胺敏感，与MGMT启动子甲基化状态无关

表观信息

未折叠蛋白反应通过提高BMI1水平使KAT2B泛素化，从而抑制KAT2B/MLKL介导的肝细胞坏死性凋亡

2026-09-13

TUSC3的表观遗传激活使胶质母细胞瘤对替莫唑胺敏感，与MGMT启动子甲基化状态无关

2026-09-11

基于mRNA的SARS-CoV-2疫苗:编码刺突蛋白的细胞内加工和聚集作为心脏细胞应激的机制性因素

2026-09-10