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在体内，核小体是染色质的基本结构单元。它由大约146bp的DNA包裹着八个组蛋白的核心组成，由四种不同类型组成。H2A、H2B、H3和H4。组蛋白受到翻译后修饰的影响，如甲基化、乙酰化、磷酸化和单泛素化。组蛋白修饰影响多个染色质模板化过程，如基因转录、DNA修复和重组。除了 "主要 "组蛋白，在染色质的特定区域或特定细胞类型中还有一些组蛋白变体。组蛋白变体参与多个过程，包括染色体分离、DNA修复、转录调节和mRNA处理。
H2A.Bbd（Barr Body Deficient）是一个组蛋白H2A家族成员。H2A.Bbd是进化最迅速的变体之一，它与主要的H2A组蛋白有48%的序列一致性。H2A.Bbd被排除在不活跃的X染色体之外，在基因组的活跃区域富集。H2A.Bbd在DNA合成的部位富集。H2A.Bbd核糖体不如含有主要H2A组蛋白的核糖体稳定，仅能组织118bp的DNA，表明H2A.Bbd染色质中的DNA可能更容易获得，因此更适合转录。H2A.Bbd参与了哺乳动物的精子发生过程。
在体外研究中，核小体是比组蛋白和组蛋白衍生的肽更具有生理意义的底物。更重要的是，在HMT检测中使用核糖体底物时，一些组蛋白甲基转移酶的活性以及特异性明显增强，如DOT1L和NSD家族酶。核小体也被广泛用于组蛋白甲基转移酶的筛选试验中，以确定小分子抑制剂用于药物开发。
生物素化重组单个核小体（H2A.Bbd），由167bp的601个DNA组成，带有5'生物素标签和两个分子的组蛋白H2A.Bbd，包括氨基酸1-115（末端）（登录号NP_001017991. 1），H2B包括氨基酸1-126（末端）（登录号NP_003509.1），H3包括氨基酸1-136（末端）（登录号NP_003520.1），和H4包括氨基酸1-103（末端）（登录号NP_003539.1）。所有这些组蛋白都在大肠杆菌中表达。组蛋白八聚体的分子量为~107 kDa。通过SDS-PAGE，重组蛋白的纯度大于95%。
重组单个核小体（H2A.Bbd）的链霉菌素下拉 - 生物素化 单个核小体（H2A.Bbd）被链霉菌素珠拉下。将输入的单个核小体（1号道）和被链霉菌素拉下的单个核小体（2号道）在12.5%的SDS-PAGE凝胶上运行，并用考马斯蓝染色。SDS-PAGE凝胶结果显示，80%以上的生物素化核小体（H2A.Bbd）被链霉菌素珠拉下。*表示链霉菌素。
生物素化重组单个核小体(H2A.Bbd)的DNA凝胶 将生物素化重组单个核小体(H2A.Bbd)在2%琼脂糖凝胶上运行，并用溴化乙锭染色。泳道1：完整的单个核小体。泳道2: 601 DNA，用于组装单核体。完整的单核体的迁移率比自由DNA高得多。琼脂糖凝胶的结果显示，几乎所有的601 DNA都包裹着组蛋白八聚体形成单个核小体。
生物素化重组单个核小体(H2A.Bbd)的Western印迹分析 将2µg生物素化重组单个核小体(H2A.Bbd)与DOT1L（Cat# 31474）在反应缓冲液中在室温下孵育3小时。用Western Blot检测反应产物的生成（H3K79me1，Cat# 39921）。只用DOT1L和只用单个核细胞体作为阴性对照。Western Blot的结果显示，单个核小体比组蛋白八聚体更适合DOT1L的底物。 -
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内容
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生物素化重组单个核小体(H2A.Bbd)
31556 20ug
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