生物素化重组单个核小体H3K9me3(EPL)

生物素化重组单个核小体H3K9me3(EPL)，Recombinant Mononucleosomes H3K9me3 (EPL) - biotinylated，非常适合用于研究酶的动力学、抑制剂筛选和选择性分析。更多视频请关注视频号【艾维缔】。哔哩哔哩【IVDSHOW】。抖音【军哥聊表观】。

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在体内，组蛋白被染色质中的DNA包裹着。因此，在体外研究中，核小体是比组蛋白和组蛋白衍生的肽更具有生理意义的底物。更重要的是，在HMT检测中使用核小体底物时，一些组蛋白甲基转移酶的活性以及特异性明显增强，如DOT1L和NSD家族酶。核小体也被广泛用于组蛋白甲基转移酶的筛选试验中，以确定小分子抑制剂用于药物开发。
生物素化重组单个核小体H3K9me3 (EPL)包括167bp的601个DNA，带有5'生物素标签和两个分子的组蛋白H2A，包括氨基酸1-130（末端）（登录号NP_003503. 1），H2B包括氨基酸1-126（末端）（登录号NP_003509.1），H3.2包括氨基酸1-136（末端）（登录号NP_066403.2），在赖氨酸9处有三甲基化，和H4包括氨基酸1-103（末端）（登录号NP_003539.1）。所有这些组蛋白都在大肠杆菌细胞中表达。组蛋白八聚体的分子量为~108 kDa。通过SDS-PAGE凝胶，重组蛋白的含量≥95%。H3K9me3（组蛋白H3三甲基Lys9）蛋白是用表达蛋白连接（EPL）技术产生。截断的人组蛋白H3.2在大肠杆菌中产生，并使用高效液相色谱法进行纯化。纯化的蛋白随后通过一个本地肽键与含有三甲基赖氨酸9的N端组蛋白尾部肽连接。
链霉菌素拉下生物素化重组单个核小体H3K9me3 (EPL)。生物素化重组单个核小体H3K9me3 (EPL)被链霉菌素珠拉下。将输入的核小体（2号泳道）和被链霉蛋白拉下的核小体（3号泳道）在13%的SDS-PAGE凝胶上运行，并用考马斯蓝染色。SDS-PAGE凝胶的结果显示，几乎所有生物素化的重组单个核小体H3K9me3 (EPL)都被链霉蛋白珠拉下来。*表示链霉菌素。
生物素化重组单个核小体H3K9me3(EPL)，DNA凝胶。生物素化重组单个核小体H3K9me3(EPL)在2%琼脂糖凝胶上运行，用溴化乙锭染色。泳道1：DNA标志物。泳道2：完整的单个核小体H3K9me3。泳道3：601 DNA。完整的单个核小体H3K9me3的迁移率比游离的601 DNA高很多。琼脂糖凝胶的结果显示，几乎所有的601 DNA都包裹着组蛋白八聚体形成核小体。
生物素化重组单个核小体H3K9me3(EPL)的Western Blot分析。分别用抗H3K9me3抗体和抗H4抗体检测未修饰的核小体（泳道1）和重组单个核小体H3K9me3（EPL）-生物素化的（泳道2）。H4被检测为加载对照。只有重组单个核小体H3K9me3（EPL）-生物素化的可以用抗H3K9me3抗体检测。
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