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DNA片段化代表晚期细胞凋亡的特征。凋亡细胞中的DNA断裂可以通过末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）检测。 TUNEL测定法依赖于DNA中存在的缺口，该缺口可通过TdT进行鉴定，TdT是一种酶，该酶催化添加标记物的dUTP。现有的所有TUNEL分析均包含剧毒的甲胂酸钠，这可能会诱导细胞凋亡并降低DNA的产生和DNA链。我们的Cell Meter TUNEL细胞凋亡测定试剂盒使用了不含甲胂酸钠的专有缓冲系统。该试剂盒基于将我们专有的荧光染料掺入凋亡过程中形成的DNA片段中。该测定法经过优化，可直接检测分离的或贴壁细胞中的细胞凋亡，而无需使用任何抗体。该试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方案。适用于荧光酶标仪，荧光显微镜或流式细胞仪。在流行的FITC通道上可以轻松检测到其信号。IVDSHOW是AAT的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒。
图1. 与未处理的对照组相比，在HeLa细胞中用100nM或1μM staurosporine（SS）处理4小时后，TUNEL反应的荧光图像。细胞与TUNEL工作液在37ºC下孵育1小时。使用带有FITC滤镜组的荧光显微镜分析绿色荧光信号。荧光标记的DNA链断裂在SS处理的细胞中显示出强烈的荧光染色。样品实验方案
简要概述
- 用测试化合物准备细胞。
- 与TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分钟至1小时。
- 洗涤细胞。
- 用4％甲醛（可选）固定细胞。
- 用带FITC滤光片的荧光显微镜或带FITC通道的流式细胞仪。读取Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）处的荧光强度。
溶液配制
工作溶液配制
将0.5μL的100X Tunnelyte Green（组分A）添加到50μL的反应缓冲液（组分B）中，使总体积为50.5μL的TUNEL工作溶液。 避光。 注意：应单独评估每个细胞系，以确定细胞密度。
实验步骤
1.根据您的特定协议，将细胞培养至密度以诱导凋亡。 对于在96孔板培养物中生长的贴壁细胞，我们建议大约30,000至50,000个细胞/孔，对于非贴壁细胞，建议大约1至2 x 106细胞/ mL。 同时，在每种标记条件下，用诱导群体相同的密度培养非诱导阴性对照细胞群体。 注意：我们用100 nM-1 µM星形孢菌素处理HeLa细胞4小时，以诱导细胞凋亡。
2.染色和固色：
2.1取出细胞培养基。
2.2向每个样品中添加50µL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分钟。
2.4除去TUNEL工作溶液，并用200 µL /孔的PBS洗涤细胞1-2次。
2.5向每个样品中添加100uL反应缓冲液（组分B）。
2.6使用Ex / Em = 490/525 nm（cut off= 515 nm）的荧光酶标仪，带有FITC滤光片组的荧光显微镜或带有FITC通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.7可选：从步骤5中移出反应缓冲液，并向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定缓冲液（未提供）。注意：对于非贴壁细胞，请添加所需量（例如2X106细胞/ mL）的4％甲醛固定液。
2.8在室温下将平板孵育20至30分钟。
2.9去除固定剂。
2.10用PBS洗涤细胞2-3次，并用100µL PBS /孔/ 96孔板替换。
2.11使用Ex / Em = 490/525 nm（cut off= 515 nm）的荧光酶标仪，带有FITC滤光片组的荧光显微镜或带有FITC通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.12可选：用1X Hoechst（组分C）在Ex / Em = 350/460 nm处染色细胞核，以进行图像分析 -
产品组分
内容
型号
规格 价格 储存温度
Cell Meter活细胞TUNEL凋亡检测试剂盒（绿色荧光） 22849 50次 0.00 -20°C 操作手册
1 1 常温
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文件资源
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22849-Cell Meter活细胞TUNEL凋亡检测试剂盒（绿色荧光） 操作手册 22849-Cell Meter活细胞TUNEL凋亡检测试剂盒（绿色荧光）相关单页 宣传单页 -
营销中心
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注意事项
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FAQ
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