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细胞核质分离试剂盒提供了从哺乳动物细胞或组织中逐步分离出核和细胞质提取物的方法。分离出的蛋白质具有较高的浓度，并保留其生物活性。细胞核质分离试剂盒的核和细胞质提取物与许多下游应用兼容，包括酶活性测定和荧光Western印迹等。
图1. 使用细胞核质分离试剂盒收集Hela细胞的核和细胞质提取物。蛋白质用荧光蛋白质定量试剂盒（Cat#.11109）进行定量。A. 将8微克核或细胞质提取物与或不与HDAC抑制剂Trichostatin A一起孵育，用Amplite® Fluorimetric HDAC Activity Assay Kit（ Cat#. 13601）测量HDAC活性。B. 使用40 ug的核或细胞质提取物的总蛋白。 用2 ug/ml的兔抗HDAC1抗体在硝酸纤维素膜上探测过夜。使用10 ug/ml的iFluorTM 647山羊抗兔IgG（H+L）（Cat#.16809）。检测由UVP多光谱成像系统（Biolite）进行可视化。M：标记物，Nu： 核提取物，Cyto： 细胞质提取物。
图2. 使用细胞核质分离试剂盒收集Jurkat细胞的核和细胞质提取物。蛋白质通过荧光蛋白质定量试剂盒（Cat#.11109）进行定量。将8微克的核或细胞质提取物与或不与HDAC抑制剂Trichostain A孵化，用Amplite®荧光法HDAC活性检测试剂盒（Cat#. 13601）测量HDAC活性。
图3. 使用细胞核质分离试剂盒收集Hela细胞的核和细胞质提取物。用荧光蛋白定量试剂盒（Cat#.11109）对蛋白进行定量。将8微克的核或细胞质提取物与或不与HDAC抑制剂Trichostain A孵化，用Amplite®荧光法HDAC活性检测试剂盒（Cat#. 13601）测量HDAC活性。
图4. 使用细胞核质分离试剂盒收集CHO细胞的核和细胞质提取物。蛋白质用荧光蛋白质定量试剂盒（Cat#.11109）进行定量。将8微克的核或细胞质提取物与或不与HDAC抑制剂Trichostain A孵化，用Amplite®荧光法HDAC活性检测试剂盒（Cat#. 13601）测量HDAC活性。
图5. 使用40 ug Jurkat细胞的核或细胞质提取物的总蛋白。 用2 ug/ml的小鼠抗α-管蛋白抗体或兔抗HDAC1抗体在硝酸纤维素膜上探测过夜。使用10 ug/ml的iFluor 647山羊抗小鼠IgG（H+L）（Cat#. 16744）或iFluor 647山羊抗兔IgG（H+L）（Cat#. 16809）。检测由UVP多光谱成像系统（Biolite）进行可视化。M：标记物，Nu： 核提取物，Cyto： 细胞质提取物。
样品实验方案
简要概述
- 用PBS冲洗细胞
- 加入500 µL细胞质提取缓冲液
- 离心20秒
- 收集上清液（细胞质提取物）
- 将沉淀重新悬浮在150 µL 1X高盐缓冲液中
- 离心20分钟
- 收集上清液（核提取物）
溶液配制
工作溶液配制
1.细胞液提取缓冲液（1X）：将100 µL的10X蛋白酶抑制剂（组分C）和1 µL的DTT（组分D）添加到0.9 mL的细胞质提取缓冲液（组分A）中。
2.核提取缓冲液（1X）：将100 µL 10X蛋白酶抑制剂（组分C）和1 µL DTT（组分D）添加到0.9 mL核提取缓冲液（组分B）中。
注意：0.5 mL 1X细胞质提取缓冲液和150 µL 1X核提取缓冲液足以进行1次测定，并根据需要准备新鲜的缓冲液。
实验步骤
1.用冷PBS冲洗细胞1次。 对于悬浮的细胞，请通过离心收集细胞。
2.向细胞中加入500 µL 1X Cytosol提取缓冲液。 对于贴壁细胞，将贴壁细胞刮入1.5 mL离心管中。
3.剧烈涡旋以完全重悬细胞。
4.以16,000 g离心1-2分钟，然后将上清液（细胞质提取物）转移到另一个干净的试管中。 将试管放在冰上以备下游使用或在-80°C下保存。
5.将沉淀重悬于150 µL 1X核提取缓冲液中。
6.剧烈涡旋以完全重悬沉淀。
7.将试管在4°C旋转30分钟。
8.以16,000g离心20分钟，然后将上清液（核提取物）转移到另一个干净的试管中。 将试管放在冰上以备下游使用或在-80°C下保存。
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产品组分
内容
型号
规格 储存温度
细胞核质分离试剂盒
60000 50次 -20°C 操作手册
1 1 常温
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营销中心
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注意事项
保存建议 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后，按照说明书建议保存于-20°C。 -
FAQ
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Circ\_001422 aggravates osteosarcoma progression through targeting miR-497-5p/E2F3 axis
Authors: Li, Xinyu and Zhao, Xin and Li, Jin and Zhang, Xiaozhan
Journal: (2022)Circular RNA Hecw1 Regulates the Inflammatory Imbalance in Spinal Cord Injury via miR-3551-3p/LRRTM1 Axis
Authors: Ban, Dexiang and Xiang, Zhenyang and Yu, Peng and Liu, Yang
Journal: Applied Biochemistry and Biotechnology (2022): 5151--5166Circular RNA circ\_UBAP2 facilitates the progression of osteosarcoma by regulating microRNA miR-637/high-mobility group box (HMGB) 2 axis
Authors: Ma, Weiguo and Zhao, Xin and Gao, Yun and Yao, Xiaobin and Zhang, Junhua and Xu, Qingxia
Journal: Bioengineered (2022): 4411--4427Hsa\_circ\_0088212-mediated miR-520 h/APOA1 axis inhibits osteosarcoma progression
Authors: Liu, Feng and Zhang, Xiangyang and Wu, Fei and Peng, Hao
Journal: Translational Oncology (2021): 101219
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