重组SETD1B-SET蛋白

重组SETD1B-SET蛋白，Recombinant SETD1B-SET protein，非常适合开展酶动力学活性测定、抑制剂筛选和选择性分析实验。更多视频请关注视频号【艾维缔】。哔哩哔哩【IVDSHOW】。抖音【军哥聊表观】。

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SETD1B（含 SET 域的 1B，组蛋白赖氨酸甲基转移酶）是组蛋白甲基转移酶（HMT）复合物（含 SETD1B-SET ASH2L、RBBP5、WDR5）的一个组成部分，可在赖氨酸 4 上产生单、双和三甲基化组蛋白 H3，但如果邻近的 "Lys-9 "残基已被甲基化，则不会产生单、双和三甲基化组蛋白 H3。组蛋白 H3 在赖氨酸 4 处的三甲基化（H3K4me3）是一种染色质修饰，通常标记活性基因的转录起始位点。该蛋白含有 SET 结构域和一个 RNA 识别图案结构域，是 V 类 SAM 结合甲基转移酶超家族的成员。

在 Sf9 细胞中表达了重组 SETD1B-SET 复合物，其中包括带有 N 端 FLAG 标记的人 SETD1B 蛋白（登录号 NP_001340274.1）的第 1669-1966 个氨基酸、不带标记的全长人 WDR5 蛋白（登录号 NP_060058.1）、不带标记的全长人 RBBP5 蛋白（登录号 NP_005048.2）和不带标记的全长人 ASH2L 蛋白（登录号 NP_001098684.1）。SETD1A-SET、WDR5、RBBP5、ASH2L 的分子量分别为 35.7 kDa、36.6 kDa、59.2 kDa 和 68.7 kDa。

该复合物适用于蛋白质-蛋白质相互作用、体外转录检测和结合检测。

重组 SETD1B-SET 复合物。10% SDS-PAGE，考马斯蓝染色。SETD1B-SET 的分子量： 35.7 kDa。WDR5 的分子量：36.6 kDa。RBBP5 的分子量：59.2 kDa。ASH2L 的分子量：68.7 kDa。纯度 >90%。

SETD1B-SET 复合物活性的 HTRF 分析。在含有 50 mM Tris-HCl pH 8.6、0.02% Triton X-100、2 mM MgCl2、1 mM TCEP 和 100 µM SAM 的 10 µl 反应体系中，将 1 µM H3 (1-21) 与不同浓度的 SETD1B-SET 复合物孵育 2 小时，然后在每个反应体系中加入 10 µl H3K4me2 抗体和 SA-XL665 混合物（在相同缓冲液中 1:100 稀释）并孵育 30 分钟。所有操作和反应均在室温下进行。使用 HTRF 检测法进行检测。

SETD1B-SET 复合物活性的 HTRF 分析。在含有 50 mM Tris-HCl pH 8.6、0.02% Triton X-100、2 mM MgCl2、1 mM TCEP 和 100 µM SAM 的 10 µl 反应体系中，将 1 µM H3 (1-21) 与不同浓度的 SETD1B-SET 复合物孵育 2 小时，然后在每个反应体系中加入 10 µl H3K4me2 抗体和 SA-XL665 混合物（在相同缓冲液中 1:100 稀释）并孵育 30 分钟。所有操作和反应均在室温下进行。使用 HTRF 检测法进行检测。
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