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重组YTHDC1(325-502)蛋白
YTHDC1(YTH Domain Containing 1)是一种替代剪接调节因子,能特异性识别并结合含 N6-甲基腺苷(m6A)的 RNA。M6A 是一种存在于 mRNA 和一些非编码 RNA 内部位点的修饰,在 mRNA 的剪接、加工和稳定性方面起着重要作用。YTHDC1 通过与 mRNA 剪接因子 SRSF3 和 SRSF10 相互作用,在替代剪接过程中充当外显子包含或外显子跳转的关键调节因子。它特异性地结合含 m6A 的 mRNA,并促进 SRSF3 募集到与 m6A 位点相邻的 mRNA 结合元件上,从而在替代剪接过程中导致外显子排除。与此相反,与 SRSF3 的相互作用会阻止与 SRSF10(一种促进外显子跳越的剪接因子)的相互作用:这会阻止 SRSF10 与其靠近含 m6A 区域的 mRNA 结合位点结合,从而抑制替代剪接过程中的外显子跳越。YTHDC1 还可能调控替代剪接位点的选择。
在大肠杆菌细胞中表达的重组 YTHDC1 (325-502) 蛋白对应于 325-502 氨基酸,含有人 YTHDC1 的 YTH 结构域序列(登录号 NP_001317627.1),其 N 端带有 6×His 标记,C 端带有 Flag 标记。该蛋白的分子量为 24.9 kDa。
重组 YTHDC1(325-502)蛋白适用于结合测定、抑制剂筛选和选择性分析研究。
结合测定条件: 将 3 µM 寡聚 m6A ssDNA(GTTGG/m6A/CTT)与不同浓度的 YTHDC1 (325-502) 蛋白在 10 µl 含 50 mM HEPES-NaOH pH 7.5、0.1% BSA 的反应体系中孵育 1 小时,然后在每个反应体系中加入 10 µl 抗FLAG 抗体和 SA-XL665 混合物(在相同缓冲液中 1:100 稀释)并孵育 30 分钟。所有操作和反应均在室温下进行。采用 HTRF 检测法进行检测。
重组 YTHDC1 (325-502) SDS PAGE 凝胶。13% SDS-PAGE 考马斯蓝染色。分子量:24.9 kDa。纯度 >90%。
重HTRF 检测 YTHDC1 (325-502) 的活性。将 Oligo m6A ssDNA(GTTGG/m6A/CTT)与不同浓度的 YTHDC1 (325-502) 蛋白在反应体系中孵育 1 小时,然后在每个反应体系中加入 FLAG 抗体和 SA-XL665 混合物(在相同缓冲液中 1:100 稀释)并孵育 30 分钟。所有操作和反应均在室温下进行。采用 HTRF 检测法进行检测。
HTRF 检测 YTHDC1 (325-502) 的活性。将 Oligo m6A ssDNA(GTTGG/m6A/CTT)与不同浓度的 YTHDC1 (325-502) 蛋白在反应体系中孵育 1 小时,然后在每个反应体系中加入 FLAG 抗体和 SA-XL665 混合物(在相同缓冲液中 1:100 稀释)并孵育 30 分钟。所有操作和反应均在室温下进行。采用 HTRF 检测法进行检测。
产品组分
内容 |
型号 |
规格 |
储存温度 |
重组YTHDC1(325-502)蛋白 | 81100 | 100ug | -80°C |
重组YTHDC1(325-502)蛋白 | 81800 | 1mg | -80°C |
操作手册 |
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常温 |
注意事项
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