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组蛋白H3是核小体的核心成分之一。核小体是染色质的最小亚基,由146个碱基对的DNA缠绕在核心组蛋白八聚体(H2A、H2B、H3和H4各两个)上组成。组蛋白H1是一种连接蛋白,存在于核小体核心与DNA进出点之间的界面处。
重组组蛋白H3K4me1(甲基化赖氨酸类似物)是利用获得专利的甲基化赖氨酸类似物(MLA)技术制备而成。在甲基化赖氨酸类似物技术中,甲基化组蛋白通过化学烷基化反应生成,该反应使用赖氨酸的甲基化类似物氨乙基半胱氨酸替换目标残基上现有的赖氨酸。氨乙基半胱氨酸在结构和化学性质上与赖氨酸相似,不过它含有一个硫化物,取代了赖氨酸的γ-亚甲基。甲基化赖氨酸类似物技术可对甲基化位点和程度进行精确控制。甲基化赖氨酸类似物技术受美国专利号8,278,112保护。
重组非洲爪蟾组蛋白H3赖氨酸4单甲基化产物(H3K4me1)在大肠杆菌中表达,并通过快速蛋白液相色谱(FPLC)进行纯化。该蛋白在110位氨基酸处发生半胱氨酸至丙氨酸的替换。重组甲基化组蛋白通过引入甲基赖氨酸类似物(MLA)的化学烷基化反应进行特异性甲基化。这种特殊的化学处理能够精确控制甲基化的位点和程度。经高分辨率电喷雾飞行时间质谱(ESI-TOF)验证,每次甲基化反应的完成度均超过99%。利用组蛋白H3的摩尔消光系数和280nm处的吸光度测定蛋白质浓度。通过SDS-PAGE检测,重组组蛋白的纯度>98%。重组组蛋白的分子量为15,271道尔顿。
重组组蛋白适合作为组蛋白翻译后修饰分析中的阳性对照,作为组蛋白修饰酶的底物,或用于体外生成染色质。

重组组蛋白H3赖氨酸4单甲基化产物经SDS-PAGE凝胶分析。1.5微克重组组蛋白H3(C110A)(泳道2)、重组组蛋白H3赖氨酸4单甲基化产物(泳道3)、重组组蛋白H3赖氨酸4二甲基化产物(泳道4)和重组组蛋白H3赖氨酸4三甲基化产物(泳道5)的SDS-PAGE分析。泳道1为分子量标准。
关键词:- 重组组蛋白H3K4me1(MLA)
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产品组分
内容
型号
规格 储存温度
重组组蛋白H3K4me1(MLA)
31208 50ug
-80°C
操作手册
1 1 常温
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