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重组组蛋白H3R8me2a(不对称)(EPL)是利用专利的表达蛋白连接(EPL)技术生成的。EPL可用于生成甲基化、乙酰化或磷酸化的组蛋白。在EPL中,组蛋白球状结构域与含有N端组蛋白尾部且具有所需位点特异性修饰的肽段相连。连接反应保留了天然组蛋白的化学键,所得重组蛋白更接近模拟天然组蛋白。
组蛋白H3是核小体的核心组成部分之一。核小体是染色质的最小亚基,由146个碱基对的DNA缠绕在核心组蛋白八聚体(H2A、H2B、H3和H4各两个)上构成。组蛋白H1是一种连接蛋白,存在于核小体核心与DNA进出点之间的界面处。
重组组蛋白H3精氨酸8位不对称二甲基化(H3R8me2a)蛋白采用表达蛋白连接(EPL)技术制备。截短的人组蛋白H3.2在大肠杆菌中表达,并通过快速蛋白液相色谱(FPLC)进行纯化。纯化后的蛋白随后通过天然肽键与含精氨酸8位不对称二甲基化的N端组蛋白尾肽相连。全长蛋白在冻干前再次纯化。利用组蛋白H3的摩尔消光系数和280nm处的吸光度确定蛋白浓度。通过SDS-PAGE分析,重组组蛋白纯度>98%,并经高分辨率电喷雾飞行时间质谱(ESI-TOF)确认。重组组蛋白的分子量为15,254道尔顿。
重组组蛋白非对称H3R8me2a(EPL)适合用作组蛋白翻译后修饰分析中的阳性对照、作为组蛋白修饰酶的底物,或用于体外生成染色质。

重组组蛋白H3精氨酸8二甲基化产物经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。2微克重组组蛋白H3精氨酸8二甲基化产物(泳道1)和1微克重组组蛋白H3精氨酸8二甲基化产物(泳道2)的SDS-PAGE凝胶分析。
关键词:- 重组组蛋白非对称H3R8me2a(EPL)
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重组组蛋白非对称H3R8me2a(EPL)
31276 25ug
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