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重组组蛋白H3K27me2（MLA）是利用获得专利的甲基化赖氨酸类似物（MLA）技术制备而成。在MLA技术中，甲基化组蛋白是通过化学烷基化反应生成的，该反应使用赖氨酸的甲基化类似物氨乙基半胱氨酸替代目标残基上现有的赖氨酸。氨乙基半胱氨酸在结构和化学性质上与赖氨酸相似，不过它含有一个硫化物，取代了赖氨酸的γ-亚甲基。MLA技术可精确控制甲基化的位点和程度。MLA技术受美国专利号8,278,112保护。
重组非洲爪蟾组蛋白H3赖氨酸27二甲基化（H3K27me2）在大肠杆菌中表达，并通过快速蛋白质液相色谱（FPLC）进行纯化。该蛋白质在第110位氨基酸处存在半胱氨酸突变为丙氨酸的情况。重组甲基化组蛋白通过化学烷基化反应特异性地进行甲基化，该反应引入了甲基赖氨酸类似物（MLA）。这种特殊的化学处理使得甲基化位点和程度能够被精确控制。经高分辨率电喷雾电离飞行时间质谱（ESI-TOF）验证，每次甲基化反应的完成度均超过99%。蛋白质浓度根据组蛋白H3的摩尔消光系数以及在280纳米处的吸光度来测定。通过SDS-PAGE检测，重组组蛋白的纯度大于98%。重组组蛋白的分子量为15,285道尔顿。
重组组蛋白H3K27me2(MLA)用于在组蛋白翻译后修饰分析中作为阳性对照，作为组蛋白修饰酶的底物，或用于体外生成染色质。
重组组蛋白H3赖氨酸27二甲基化产物经SDS-PAGE凝胶分析。1.5微克重组组蛋白H3（C110A）（第2泳道）、重组组蛋白H3赖氨酸27单甲基化产物（第3泳道）、重组组蛋白H3赖氨酸27二甲基化产物（第4泳道）以及重组组蛋白H3赖氨酸27三甲基化产物（第5泳道）的SDS-PAGE分析。第1泳道为分子量标记。
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产品组分
内容
型号
规格 储存温度
重组组蛋白H3K27me2(MLA)
31215 50ug
-80°C
操作手册
1 1 常温
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