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我们的iFluor®染料经过优化，适用于标记蛋白质，尤其是抗体。iFluor® 594染料的荧光激发和发射最大值分别约为588纳米和604纳米。iFluor® 594系列具有与Texas Red®和Alexa Fluor® 594相似的光谱特性（Texas Red®和Alexa Fluor® 594是Invitrogen的商标）。iFluor® 594系列在pH值3至11的范围内不受pH影响。这些光谱特性使这一新型染料系列成为Texas Red®和Alexa Fluor® 594的优良替代品。与Texas Red®相比，iFluor® 594更容易与RPE偶联，偶联产率更高，且所得的RPE-iFluor® 594串联体具有更好的FRET效率。iFluor® 594 SE稳定性良好，对蛋白质氨基具有良好的反应性和选择性。
产品优势
1.高水溶性： 可以不用有机溶剂进行偶联，在储存期间不易沉淀；
2.出色的光稳定性：荧光信号稳定，适合长时间成像；
3.荧光亮度强：比其他光谱相似偶联物（例如 Alexa Fluor® 染料、荧光素染料、花菁染料等）的荧光更强；
4.pH值不敏感：在广泛的pH范围内具有很高的荧光强度；
适用范围
主要用于标记蛋白或抗体
实验方案
溶液配制
除非另有说明，所有未使用的储备液应在制备后分装，在 -20°C 下储存避免反复冻融
1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：
将 100 µL 反应缓冲液（例如，pH 值约为 8.5 至 9.0 的 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如，抗体、蛋白质浓度 > 2 mg/mL（如果可能））混合得到 1 mL 蛋白质标记储备液。
注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。
注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，除去蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。
注3：不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白（BSA）抗体或明胶不会被很好的标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，获得好的标记结果。
注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，标记效率会显着降低。为获得合适标记效率，建议蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。
2.准备染料储备溶液（溶液B）：
将无水DMSO加入到iFluor 594 SE小瓶中制备10mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B），立即使用。 染料储备溶液的长期储存会降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免反复冻融。
样本实验方案
（本方案适用 Goat anti-mouse IgG 和iFluor 594 SE的共轭，每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。）
进行偶联反应：
1.使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL，蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。
注意：建议使用溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比为10:1。如果太少或太高，可以尝试5:1、15:1和20:1来确定合适的染料/蛋白质比。
2.在室温下继续旋转或摇动反应混合物30-60分钟
纯化偶联
（以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料蛋白偶联物的一个例子）
1.按照产品说明准备Sephadex G-25柱。
2.将“进行偶联反应”步骤中的反应混合物装入Sephadex G-25柱的顶部。
3.当样品刚低于顶部树脂表面时，立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。
4.向样品中加入更多的PBS（pH 7.2-7.4）完成柱子纯化。将含有目标染料-蛋白质缀合物的组分合并。
注意：如果需要立即使用，染料-蛋白质缀合物物需要用染色缓冲液稀释，并分装。
注意：为了长期储存，染料蛋白缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。
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产品组分
内容 型号 规格 储存温度
iFluor 594琥珀酰亚胺酯
71029 100ug
-20°C iFluor 594琥珀酰亚胺酯
1029 1mg
-20°C iFluor 594琥珀酰亚胺酯
71508 5mg
-20°C iFluor 594琥珀酰亚胺酯
71558 10mg
-20°C 操作手册
1 1 常温
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营销中心
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注意事项
保存建议 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后，按照说明书建议保存于-20°C。 -
FAQ
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Analyzing Photoreceptor Degeneration and Preservation in a Retinitis Pigmentosa Murine Model
Authors:
de Jesus, Maria Clara da Silva and Cruz, Douglas Penaforte and Le{\'o}n, Greysa Sara{\'\i} Barrios and Cris{\'o}stomo, Millena Costa and Magalh{\~a}es, Camila Feitosa and de Mattos, Aline Estacio Ribeiro and Fragel-Madeira, Lucianne
Journal:
Journal of Visualized Experiments (JoVE) (2025): e68324
A broadly applicable protein-polymer adjuvant system for antiviral vaccines
Authors:
Wang, Caiqian and Geng, Yuanyuan and Wang, Haoran and Ren, Zeheng and Hou, Qingxiu and Fang, An and Wu, Qiong and Wu, Liqin and Shi, Xiujuan and Zhou, Ming and others,
Journal:
EMBO Molecular Medicine (2024): 1--33
Authors:
Peng, Tianhang and Ding, Meng and Yan, Hanhui and Zhang, Ping and Tian, Rui and Guo, Yin and Zheng, Lan
Journal:
Physiological Reports (2024): e15929
Authors:
Qiao, Chenxiao and Wang, Song and Xu, Yipeng and He, Yedie and Cai, Zhijian and Wang, Hua
Multiplex Immunofluorescence: A Powerful Tool in Cancer Immunotherapy
Authors:
Sheng, Wenjie and Zhang, Chaoyu and Mohiuddin, TM and Al-Rawe, Marwah and Zeppernick, Felix and Falcone, Franco H and Meinhold-Heerlein, Ivo and Hussain, Ahmad Fawzi
Journal:
International Journal of Molecular Sciences (2023): 3086
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