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在活细胞内追踪mRNA对于理解RNA生物学以及改进RNA疗法的研发至关重要。传统的荧光标记物，如氰基染料（例如Cy3或Cy5），虽有一定用途，但由于其体积较大，往往会破坏RNA的天然结构和功能。如今，一种新方法提供了一种颇具前景的替代方案：tCO——一种荧光三环胞嘧啶类似物（图1A和B）。
在一项突破性研究中，Baladi等人证明，tCOTP（tCO的三磷酸衍生物）可通过末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）进行3’端标记，或在体外转录过程中以高达100%的tCOTP/CTP替代率酶促掺入mRNA中（图1C）[1]。与传统染料不同，tCOTP能维持正常的碱基配对和堆叠，对mRNA的天然结构与功能造成的破坏极小。这使科学家能够在不干扰重要生物学过程的情况下观察细胞中的mRNA。大量测试表明，无论是在体外还是活细胞中，tCO标记的mRNA都能高效翻译为正确折叠且定位准确的蛋白质（图1D和E）。这种类天然标记技术使研究人员能够实时追踪mRNA的递送、稳定性和蛋白质合成动态，为RNA生物学研究提供了宝贵的见解。
图1：荧光tCOTP的高效整合保留了RNA功能和蛋白质翻译（根据Baladi等人<2021年>Stealth Fluorescence Labeling for Live Microscopy Imaging of mRNA Delivery）。
A) 胞苷5'-三磷酸（CTP）与荧光三环胞嘧啶类似物（tCOTP）的结构比较。
B) 经紫外线照射的、用tCO进行末端标记的纯化TdT3 RNA溶液的图片。
C) T7 RNA聚合酶将tCO整合到全长mRNA中。通过使用比例不断增加的tCOTP/CTP替代物（0-100%）进行体外转录来生成RNA探针。通过琼脂糖凝胶电泳对产物进行分析，直接观察标记的RNA，并使用RNA嵌入剂溴化乙锭（EtBr）检测总RNA。L： ladder。
D）钙调蛋白-3（CALM3）mRNA的无细胞翻译。体外翻译的蛋白质印迹（WB）
E） 人SH-SY5Y细胞中tCO标记mRNA的翻译和可视化。共聚焦延时实验的快照图像，用于监测通过化学转染导入过度表达mRFP-Rab5（用于标记早期内体，呈橙色）的细胞中的75% tCO标记mRNA（红色）的细胞内运输情况。细胞核中H2B-GFP蛋白的表达结果显示为绿色。
For general laboratory use.
Please centrifuge briefly before opening (volume ≤2 ml).Shipping: shipped on gel packs
Storage Conditions: store at -20 °C
Short term exposure (up to 1 week cumulative) to ambient temperature possible.Shelf Life: 12 months after date of delivery
Molecular Formula: C15H18N3O15P3 (free acid)
Molecular Weight: 573.24 g/mol (free acid)
Exact Mass: 573.00 g/mol (free acid)
Purity: ≥ 95 % (HPLC)
Form: solution in 10 mM Tris-HCl
Color: yellow
Concentration: 10 mM - 11 mM
pH: 7.5 ±0.5
Spectroscopic Properties: λexc 360 nm, λem 460 nm, ε 10.0 L mmol-1 cm-1 (Tris-HCl pH 7.5)
Applications:
Incorporation into RNA/cRNA
- Random labeling via in vitro Transcription with T7 and SP6 RNA Polymerase [1]
- 3’-End Labeling of RNA oligonucleotides with Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT)[1] -
产品组分
内容
型号
规格 储存温度
tCOTP NU315-01 10ul(10mM)
-20 °C
tCOTP NU315-02 50ul(10mM)
-20 °C 操作手册
1 1 常温
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营销中心
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注意事项
保存建议 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后，按照说明书建议保存于-20°C。 -
FAQ
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Selected References:
[1] Baladi et al. (2021) Stealth Fluorescence Labeling for Live Microscopy Imaging of mRNA Delivery. J Am Chem Soc. 143(14):5413-5424.
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