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与泛素（Ub）的共价结合是调节蛋白质稳定性、功能和定位的主要翻译后修饰之一。泛素化是三种酶协同作用的结果：泛素激活酶（E1）、泛素结合酶（E2）和泛素连接酶（E3）。泛素化的特异性和效率在很大程度上由E3酶决定，该酶通过同时结合E2∼Ub结合物和底物蛋白，引导泛素结合级联反应的最后一步。这一步确保泛素从E2∼Ub转移到底物上，使其发生单泛素化或多泛素化。p53肿瘤抑制蛋白通过与MDM2（小鼠双微粒体2同源物）的相互作用受到调控，MDM2作为泛素连接酶（E3）靶向p53使其降解。MDM2对p53进行泛素化，导致p53通过泛素-蛋白酶体途径快速降解。MDM2介导的p53失稳和失活被认为在多种人类癌症中发挥着关键作用。破坏MDM2与p53的相互作用被视为抗癌药物研发的一个极具吸引力的策略。
MDM2驱动的p53泛素化检测试剂盒是一种灵敏的AlphaLisa®高通量筛选（HTS）检测方法，设计用于在均相384反应形式中测量MDM2（小鼠双微体2同源物）E3连接酶活性。该检测试剂盒包含足够的生物素化泛素、ATP、FLAG标签p53、检测缓冲液、检测缓冲液、纯化的UBE1（泛素激活酶E1）、UbcH5b（泛素结合酶H5b）（E2）和MDM2（E3），可进行384次反应。该检测可检测p53的单泛素化和多泛素化。
在生物素偶联泛素和ATP存在的情况下，将E1和E2酶与E3复合物以及FLAG标签化的p53共同孵育。p53的泛素化过程是通过多步泛素转移实现的，即从E1转移到E2，再转移到E3，最后由E3介导泛素与p53结合。接下来，加入受体珠，随后加入链霉亲和素偶联的供体珠。然后测量Alpha计数。Alpha计数的增加与FLAG标签化p53的单泛素化或多泛素化程度成正比。
Assay Kit Format
AlphaLISA®
Species
Human
Target(s)
MDM2
UniProt #
Q00987
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产品组分
内容 型号
规格 储存温度
MDM2驱动p53泛素化检测试剂盒
CN82179-01 384次
-20°C MDM2驱动p53泛素化检测试剂盒
CN82179-02 768次
-20°C 操作手册
1 1 常温
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营销中心
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注意事项
保存建议 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后，按照说明书建议保存于-20°C。 -
FAQ
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Product Citations
Harman, R.M., Sipka, A., Oxford, K.A., et al. The mammosphere-
derived epithelial cell secretome modulates neutrophil functions in the bovine model. Front. Immunol. 15, 1367432 (2024).
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