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与泛素（Ub）的共价结合是调节蛋白质稳定性、功能和定位的主要翻译后修饰之一。泛素化是三种酶协同作用的结果：泛素激活酶（E1）、泛素结合酶（E2）和泛素连接酶（E3）。泛素化的特异性和效率在很大程度上由E3酶决定，E3酶通过同时结合E2∼Ub结合物和底物蛋白，指导泛素结合级联反应的最后一步。这一步确保泛素从E2∼Ub转移到底物上，从而使其发生单泛素化或多泛素化。
DDB1和CUL4相关因子11（Dcaf11，也称为WD重复结构域23，即WDR23）是一种与Cul4A或Cul4B结合形成具有E3连接酶活性的复合物的蛋白质。Dcaf11 E3连接酶可泛素化多种底物，包括p21（细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1或CDK相互作用蛋白1）。p21通过抑制CDK（细胞周期蛋白依赖性激酶）和PCNA（增殖细胞核抗原）参与细胞周期调控。它还介导p53对DNA损伤的反应，其水平与癌症的淋巴结转移和总体生存率相关。敲低Dcaf11复合物的任何组分都会降低p21的泛素化水平，从而抑制骨肉瘤细胞的增殖。使用靶向Dcaf复合物的药物可能是一种可行的癌症治疗方法。
Dcaf11驱动p21泛素化检测试剂盒是一种灵敏的AlphaLisa®高通量筛选（HTS）检测试剂盒，旨在以均相384反应形式测量Dcaf11（DDB1和Cul4相关因子11）E3连接酶的活性。该检测试剂盒配备了足够进行384次反应的生物素化泛素、ATP、GST标签p21、检测缓冲液、检测缓冲液、纯化的UBE1（E1）、UbcH5b（E2）以及Rbx1/Cul4B/Dcaf11/Ddb1复合物（E3）。此检测可检测p21的单泛素化和多泛素化。
首先，在生物素偶联泛素和ATP存在的情况下，将E1和E2酶与E3复合物以及靶蛋白p21（GST标签）一起孵育。p21的泛素化过程是一个多步骤的泛素转移过程，从E1转移到E2，再转移到E3，最后由E3介导泛素与p21结合。接下来，加入谷胱甘肽受体磁珠，随后加入链霉亲和素偶联的供体磁珠，并测量Alpha计数。Alpha计数的增加与GST标签p21的单泛素化或多泛素化程度成正比。
Assay Kit Format
AlphaLISA®
Species
Human
UniProt #
UBE1: P22314; UbcH5b: P62837; Rbx1: P62877; Cul4B: Q13620; Dcaf11: Q8TEB1; Ddb1: Q16531
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产品组分
内容 型号
规格 储存温度
Dcaf11驱动p21泛素化检测试剂盒
CN78892-01 384次
-20°C Dcaf11驱动p21泛素化检测试剂盒
CN78892-02 768次
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1 1 常温
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