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众所周知，RAS突变导致了超过30%的人类癌症。尽管最近已开发出新的疗法来减轻RAS突变的促肿瘤作用，但其中一种突变体KRAS（G12V）对大多数已知抑制剂具有耐药性。例如，小分子AMG510（安进公司）能够通过将KRAS构象锁定在GDP结合状态，阻断由多种KRAS（G12）突变体介导的信号通路。然而，KRAS（G12V）对这种抑制剂并不敏感。有望通过影响KRAS突变体G12V中核苷酸交换（GDP向GTP转化）反应的新化合物，来抑制由KRAS（G12V）驱动的肿瘤中的肿瘤细胞生长。MRTX1133能选择性抑制KRAS G12D突变体，而对KRAS野生型无抑制作用，其在体外对KRAS（G12V）显示出良好的活性。新型高特异性抑制剂的研发将开辟新的治疗途径。
BODIPY FL-GDP是一种混合异构体，其荧光团通过连接子连接在核糖环的2’或3’位。它是一种绿色荧光染料，具有与荧光素或Alexa Fluor™ 488相似的激发和发射特性，其特点是消光系数高、量子产率高，且对pH变化相对不敏感。该染料的激发态寿命为5纳秒或更长。它是一种常用的染料，可用于对GTP酶进行荧光标记并确定其GTP/GDP状态。
KRAS（G12V）核苷酸交换检测试剂盒是一种荧光均相检测试剂盒，旨在通过使用BODIPY®-GDP监测KRAS（G12V）与GDP或GTP的结合状态，对KRAS（Kirsten大鼠肉瘤）（G12V）拮抗剂/抑制剂进行筛选和分析。该KRAS（G12V）核苷酸交换检测试剂盒提供便捷的96孔或384孔板格式，包含足够的、用BODIPY®-GDP标记的纯化重组KRAS（G12V）同工型B、GTP、检测缓冲液和添加剂，可进行100次或400次酶反应。该试剂盒可采用两种不同的实验方案，从而提供更大的实验灵活性。它既可以在固定GTP浓度下滴定抑制剂，也可以在固定抑制剂浓度下滴定GTP。
KRAS在结合GTP后被激活并发生构象变化。随后，随着GTP水解为GDP，KRAS会回到与GDP结合的失活状态。在该实验中，KRAS预先负载了荧光BODIPY-GDP，因此处于失活状态。在EDTA存在的情况下加入GTP，会取代BODIPY-GDP，因为KRAS对GTP的亲和力大于其对GDP的亲和力。由于游离的BODIPY-GDP与蛋白结合时相比荧光较低，当BODIPY-GDP被取代时，荧光强度会下降。一些KRAS抑制剂会将KRAS锁定在（失活的）GDP结合构象，并阻止GDP/GTP交换。在这种情况下，荧光强度保持较高水平，且随着更多BODIPY-GDP与KRAS结合，荧光强度与药物浓度相关。
Assay Kit Format
Fluorogenic
Species
Human
Mutation
G12V
Supplied As
The KRAS(G12V) Nucleotide Exchange Assay Kit comes in a convenient format, with enough purified recombinant KRAS(G12V) labeled with BODIPY®-GDP, GTP, assay buffer and additives for 100 or 400 reactions.
Materials Required But Not Supplied
- Fluorescent microplate reader capable of reading λex/em=470 nm/525 nm
- Adjustable micropipettor and sterile tips
Target(s)
KRAS(G12V)
UniProt #
P01116
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产品组分
内容 型号
规格 储存温度
KRAS(G12V)核苷酸交换检测试剂盒
78519-01 96次
-20°C KRAS(G12V)核苷酸交换检测试剂盒
78519-02 384次
-20°C 操作手册
1 1 常温
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营销中心
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注意事项
保存建议 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后，按照说明书建议保存于-20°C。 -
FAQ
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References
Ostrem J.M., et al., 2013. Nature 503: 548-551.
Patricelli M.P., et al., 2016. Cancer Discover. 6: 316-329.
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