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增强型绿色荧光蛋白是常见的报告分子,激发时会发出强烈且明亮的绿色荧光。EZ Cap™ EGFP mRNA的浓度约为1 mg/mL。通过共转录加帽生成Cap 1结构。Cap 1结构更适合哺乳动物系统,并且比Cap 0结构(ARCA和mCap)具有更高的转录效率。添加poly (A) tail增加mRNA在体外和体内的稳定性和寿命。poly (A) tail 在提高翻译启动效率方面也起着重要作用。
产品有效期 2年 分子量 ~322 kD 浓度 ~1 mg/mL 序列长度 996 nucleotides 溶解缓冲液 1 mM Sodium Citrate, pH 6.4 存储条件 -40°C及以下 运输条件 干冰 注意事项 请将其于冰上溶解,并小心防止RNase污染降解。尽可能避免反复冻融,不要涡旋震荡。首次使用时,将其轻柔离心并分成几份,可供单独使用。使用不含RNase的试剂和耗材,使用适当的无RNase技术。直至与转染试剂混合,才可加入含有血清的培养基中。
关键词:- EZ Cap EGFP mRNA
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产品组分
组分内容
型号 规格
储存温度
EZ Cap EGFP mRNA R1002-01 100 ug(1mg/ml) -40℃
EZ Cap EGFP mRNA R1002-02 1 mg(1mg/ml) -40℃ EZ Cap EGFP mRNA R1002-03 5 mg(1mg/ml) -40℃ 说明书
1份 1份 室温
*注意:在使用各溶液之前,将溶液离心至管底。
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文件资源
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文件内容
资源说明

R1002-EZ Cap EGFP mRNA
操作手册 
R1002-EZ Cap EGFP mRNA相关说明
宣传单页 -
注意事项
保存建议 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后,按照说明书建议保存于-20°C。 警告 一般仅供科研使用,请勿用于临床与诊断。 -
FAQ
1)Q:如何选择合适的RNA产品?
A: 可以根据不同的实验目的,来进行选择:
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- 追踪转染和翻译的效率: 推荐使用APExBIO的报告基因mRNA(如EGFP、萤火虫荧光素酶等),追踪转染效率和蛋白表达时长;检测基因表达和细胞活性;研究活体成像中,mRNA的体内定位和分布情况;优化转染条件和验证LNP递送系统。
- 研究基因编辑, 基因功能和基因治疗: 推荐使用APExBIO的各类功能蛋白mRNA,包括肿瘤相关靶点 (p53, PTEN等),细胞因子 (IL-12, IL-10 等), 基因编辑工具(spCas9, Cre等), 基因替换 (EPO等) 和 抗原 (OVA, 新冠Spike 等)。
- 需要更长效的蛋白表达:推荐使用APExBIO的自复制RNA (saRNA) 或环状RNA (circRNA)。用更少量的自复制RNA,就能在细胞内实现更持久、高效的蛋白表达。 而环状RNA的结构更稳定,表达时间较长,表达量也较高。
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2)Q:APExBIO 的mRNA产品,在技术上有哪些核心优势?
A:我们的mRNA产品旨在提供稳定、高效且低毒性的蛋白表达,核心技术优势包括:
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- 先进的加帽技术:使用Cap 1结构 (EZ Cap™ Cap) 加帽,其翻译效率更高,并能更有效地避免被宿主先天免疫系统识别。加帽效率高达90-99%。
- 多样的修饰选择:提供m1Ψ、5-moUTP和Cy5-UTP等多种修饰核苷酸,可显著降低免疫原性,提升mRNA稳定性和蛋白产量。
- 严格的质量控制:对加帽效率、纯度、完整性和无菌性等关键指标进行严格质控,确保产品批次间的一致性。
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3)Q:加帽技术的重要性是什么?对mRNA的稳定性和免疫原性有什么影响?
A:至关重要。5'帽子结构 (Cap) 是mRNA分子的“保护罩”,防止其被细胞内的核酸外切酶快速降解,从而保证稳定性和效力。Cap1 作为新一代的加帽类似物,能被细胞识别为“自体RNA”,避免免疫激活,高效表达蛋白。APExBIO的EZ Cap™ 系列产品均为Cap1结构。
4)Q:除了加帽技术,mRNA合成中还有哪些关键要素?
A:一个完整的体外合成的mRNA还需具备:优化的5'和3'非翻译区(UTR)以增强翻译效率和稳定性;长度适中(如100个碱基)的Poly(A)尾,以保护mRNA并提高翻译效率;以及基于下游应用来选择,修饰核苷酸(如m1Ψ)和密码子优化。
5)Q:如何根据实验目的,来选择合适的RNA修饰?
A:APExBIO提供各类功能的修饰核苷酸:
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- m1Ψ(N1-甲基假尿苷):能大幅度地抑制先天免疫反应,显著提高蛋白表达量。更适合体内实验,常见于mRNA疫苗研究中。
- ψUTP(假尿苷),5-moUTP ( 5-甲氧基尿苷) 和5mCTP(5-甲基胞苷):都能抑制免疫原性,增强mRNA稳定性和翻译效率。5mCTP常见于自复制RNA(saRNA)。
- 荧光标记/生物素标记的核苷酸(Cy5 UTP, Biotin UTP等):应用于mRNA的荧光成像,追踪mRNA的递送和定位。
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6)Q:RNA操作注意事项有哪些?
A:由于RNA易被降解,请务必遵循以下操作规范:
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- 解冻:使用前,将产品置于冰上充分解冻。
- 分装:首次使用时,建议进行轻柔离心后,将产品分装,以避免反复冻融影响活性。
- 防污染:全程使用无RNase的耗材和试剂,并保持操作环境清洁。
- 转染:请先将RNA与转染试剂混合,再加入到含有血清的细胞培养基中,以防止血清中的RNase导致RNA降解。
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7)Q:RNA的蛋白表达效果不理想,怎么办?
A:您可以按照以下方法进行排查:
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- 检查RNA是否降解。确认产品是否按要求储存、操作是否规范,有无反复冻融等。
- 检查转染步骤。可以使用报告基因mRNA(如EZ Cap™ Firefly Luciferase mRNA)作为阳性对照,验证细胞状态、转染试剂和操作流程。
- 优化实验条件。尝试调整:转染试剂与RNA的比例,细胞密度,孵育时长和蛋白检测时间点等。
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若以上方法无法解决问题,请提供您的实验细节,我们将为您提供专业的技术支持。
8)Q:如果产品在运输过程中出现问题怎么办?
A:我们使用干冰运输以保证产品活性。若您对收到的产品状态有任何疑虑(如干冰完全融化、包装损坏),请立即拍照并及时联系我们,客户满意度是我们的首要任务,我们将为您妥善处理。
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如果您对我们的产品感兴趣,请留下您的信息,我们将尽快与您联系,谢谢!
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