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在基因表达、肿瘤发生、其他遗传和表观遗传疾病中，DNA甲基化扮演着极为重要的角 色。尤其在癌症方面。因此,在一些基因检测甲基化病变的细胞中可以提供非常有用的信息。 在最近几年，对于基因序列检测与甲基化的检测开发了很多的方法。其中MS-PCR是最常用的。 通过亚硫酸氢盐将胞嘧啶转化成尿嘧啶，能够特异性的与甲基化的引物结合并扩增。 能否特异性的扩增甲基化的DNA就成为一个很大的挑战。因原始序列中富含GC的胸腺 嘧啶冗长，对于使用聚合酶来识别就变的很难。因此，扩增是很难的，因为特异性的扩增和 在化学转化后减少引物的结合时间，这需要花费很长时间。 我司提供的快速MS-qPCR试剂盒提供了一整套试剂和方法，来解决以上遇到的问题。这个试剂盒可进行甲基化特异定量PCR,操作简便，快捷，灵敏度高，可重复利用。试剂盒中 新型的热启动DNA聚合酶可以减少MS-qPCR所需的循环数，使实验过程从近2·5小时缩短到不 超过70分钟。本试剂盒适用于使用痕量的DNA进行快速甲基化特异性定量PCR。试剂盒通过 提高引物-亚硫酸氢盐 DNA模板间的退火效率来提高了MS-qPCR的灵敏度和特异性，省时高效。这个结果可以保证在很长时间内储存并更高效地进行MS-qPCR。
针对修饰后的核苷酸进行扩增胞嘧啶(C)完全转化：用DNA甲基化极速修饰试剂盒处理从 3 种癌细胞系中分离的 200 ng基因组 DNA。然后，使用未转化 DNA 特异性引物和已转化 DNA 特异性引物（β-actin，110 bps）分别测定每个处理样本中未转化 DNA 和已转化 DNA 的含量。A：实时 PCR；B：终点 PCR。DNA甲基化极速修饰试剂盒处理过的 DNA 已完全转化，45 个循环后，处理过的样品中没有未转化的 DNA。有效保护 DNA： 使用 DNA甲基化极速修饰试剂盒转换不同数量（0.2 ng-200 ng）的完全甲基化人类基因组 DNA。1 µl 的 20 µl 洗脱液用于实时 qPCR，一对引物用于扩增转化后的 DNA。使用 DNA甲基化极速修饰试剂盒，只要 0.2 ng DNA 就足以进行亚硫酸氢盐转化。A：实时 PCR；B：起始 DNA 量-CT 值曲线。合作开发的快速MS-qPCR试剂盒(qMSP专用酶)。这个工具是专门为qMSP实验而设计的，具有如下的优势和特性： 极其快速的试剂盒，70分钟内完成反应。 高扩增效率获得丰富的产物。 高精确度和对MSP的特异性，降低假阳性概率。 方便的混合缓冲液模式使得配置反应体系更加简单。 操作简便、结果可靠、统一的分析条件。 可用于所有基于模块的实时PCR设备。
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产品组分
*注意：在使用之前，应将溶液离心至管底。组分内容
型号：A-P-1028-100(100次)
型号：A-P-1028-200(200次) 储存温度
MM
Master Mix (2x )*
1管（1.0 ml） 2管（1.0 ml） -20°C DFW
DNA/RNA-free Water(双蒸水)* 1管（1.2 ml） 2管（1.2 ml） -20°C 对照引物【Control Primers】（β-actin）
F
Forward (100 uM)*
8 ul 20 ul -20°C R
Reverse (100 uM)*
8 ul 20 ul -20°C 操作手册
1
1 室温
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文件资源
文件下载 文件内容 资源说明 
A-P-1028-快速MS-qPCR试剂盒 操作手册 A-P-9004-高保真cDNA 第一链合成试剂盒相关产品 宣传单页 -
营销中心
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注意事项
保存建议 推荐蓝冰或冰袋运输。当您收到产品后，按照说明书建议保存各组分。 警告 本品仅供科研使用，请勿用于临床与诊断。 -
FAQ
1.本试剂盒中提供的是人的b-actin引物，具体的序列信息见下：
F: 5’-GGA GGT AGG GAG TATA TAG GT-3’
R: 5’-CCA ACA CAC AAT AAC AAA CA-3’
2.如果您做的小鼠标本的实验，建议您自己根据如下序列，合成b-actin引物：
Forward 5'-TGTGATTGATAGTAGGAAGGTGTGA-3';
Reverse 5'-ACCCAAATCCAAAAATCACG-3'.
3.如果您做的大鼠标本的实验，建议您自己根据如下序列，合成b-actin引物：
Primer F: 5'-TGAGGAATATTTAGAAGGGAT-3'
Primer R: 5'-ACTCTCCAAATACCCACAC-3'
4.快速MS-qPCR试剂盒(型号：A-P-1028)与快速qPCR试剂盒(型号：A-P-1029)有什么区别？
两个试剂盒的引物不同(A-P-1028的引物是β-actin, A-P-1029的引物是GAPDH)。 此外，A-P-1028的Master Mix含有更多的试剂，用于改善富含G-C的DNA区域(通常在亚硫酸氢盐处理后的目标DNA区域看到)。 因此，试剂盒A-P-1028更适用于亚硫酸氢盐DNA扩增。 A-P-1029-快速qPCR试剂盒适用于未修饰DNA的PCR扩增。
5.∆Ct值是什么意思?
Delta Ct值为靶基因Ct减去内控基因(如β-actin) Ct后的Ct值。
6.我目前正在使用终点PCR。 我可以用相同的PCR引物来使用这个试剂盒吗?
是的，试剂盒A-P-1028主要用于实时PCR，但它也适用于使用引物覆盖DNA < 300 bps区域的端点PCR，以获得最佳结果。
7.为了可靠的检测，需要分析多少个CGs ?
至少有一个CG位点应该被正向和反向引物覆盖。 一个CpG岛至少需要覆盖6-10个CpG(长度100- 150bps)。
8.哪种类型的PCR仪与本试验兼容?
任何PCR仪均可与本试剂盒兼容。
9.我还需要购买哪些与此试剂盒相关的产品?
在进行MS-qPCR之前，DNA样本应经过亚硫酸氢盐处理。 我们的DNA甲基化极速修饰试剂盒A-P-1026对亚硫酸氢盐修饰DNA有很好的效果。
10.我不知道如何设计我的引物。 在甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR, MSP)中，是否需要两对引物，一对用于甲基化区域，另一对用于未甲基化区域?
一般来说，针对甲基化区域的一对引物就足以进行MS-PCR。
11.要计算ΔCt，我应该如何使扩增的基因标准化? 我是否应该将甲基化和未甲基化的基因归一化到β-actin管理基因?
是的，β-actin基因可以作为参考(标准化)，以确定你的DNA是否被很好地修饰，也可以用来评估PCR扩增效率。
如果DNA经过亚硫酸氢盐处理，该试剂盒用于PCR，甲基化和非甲基化基因都可以用betaglobin(引物应适用于该基因的修改测序)或β-actin(引物包含在试剂盒中)进行归一化。 如果引物对甲基化的DNA序列是特异性的(除CpG位点外，所有的C都被T取代)，则未甲基化的基因不会被扩增。 同样，甲基化的DNA也不会被非甲基化DNA序列的特异性引物扩增(所有的C都被T取代，包括CpG位点上的C)。
12.我应该如何分析我的MS-qPCR结果?
通过使用这款试剂盒从qPCR检测中生成的Ct值(周期阈值)，可以定量处理与未处理或正常与病变样本之间的相对甲基化水平。 每个样本Ct值首先应与b-肌动蛋白对照Ct值归一化。
13.DNA甲基化qPCR和传统qPCR的区别是什么？MS-qPCR需要特殊引物吗？快速MS-qPCR试剂盒（型号：A-P-1028）是否基于SYBER绿色？
甲基化特异性（MS）-PCR的扩增过程与传统PCR相似，但引物设计不同。我们的快速MS-qPCR试剂盒是一种基于SYBR绿色的扩增方法，用于MS-PCR的引物应该对转换后的DNA序列具有特异性，其中C变为T。
14.采用qPCR原理是如何分析计算DNA甲基化水平的？
甲基化水平的量化策略。(A) 使用标准 DNA 样本进行绝对量化。样本 DNA、对照 DNA（完全甲基化的 DNA 或完全未甲基化的 DNA）和标准 DNA 用 M-primer 或 U-primer 扩增。准确的
甲基化或未甲基化 DNA 分子的准确数量。含有已知数量的 DNA 分子。甲基化水平的计算公式如下：甲基化水平（%）= 100 ×[甲基化 DNA 分子数/（甲基化 DNA 分子数 + 未甲基化 DNA 分子数）]。
相对定量：参考基因座和对照 DNA 的相对定量。扩增曲线显示的是具有代表性的 MethyLight 数据。样本 DNA 和对照 DNA（完全甲基化的 DNA）的数量通过通用引物（单引物）和探针进行归一化。
在此条件下，使用甲基化特异性引物（M-引物）和探针比较样本和对照的甲基化 DNA 数量。如图所示，可得到一个 ∆∆Ct 值，并计算出相对甲基化水平。已甲基化和未甲基化的 CpG 位点分别以闭合圆圈和开放圆圈表示。 -
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