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快速MS-qPCR试剂盒(qMSP专用酶)

可用于所有基于模块的实时PCR设备。
产品组分
组分内容 |
型号:A-P-1028-100(100次) |
型号:A-P-1028-200(200次) |
储存温度 |
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MM |
Master Mix (2x )* |
1管(1.0 ml) | 2管(1.0 ml) | -20°C |
DFW |
DNA/RNA-free Water(双蒸水)* | 1管(1.2 ml) | 2管(1.2 ml) | -20°C |
对照引物【Control Primers】(β-actin) |
||||
F |
Forward (100 uM)* |
8 ul | 20 ul | -20°C |
R |
Reverse (100 uM)* |
8 ul | 20 ul | -20°C |
操作手册 |
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1 |
1 |
室温 |
文件资源
文件下载 | 文件内容 | 资源说明 |
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A-P-1028-快速MS-qPCR试剂盒 | 操作手册 |
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A-P-9004-高保真cDNA 第一链合成试剂盒相关产品 | 宣传单页 |
注意事项
保存建议 | 推荐蓝冰或冰袋运输。当您收到产品后,按照说明书建议保存各组分。 |
警告 | 本品仅供科研使用,请勿用于临床与诊断。 |
FAQ
1.本试剂盒中提供的是人的b-actin引物,具体的序列信息见下:
F: 5’-GGA GGT AGG GAG TATA TAG GT-3’
R: 5’-CCA ACA CAC AAT AAC AAA CA-3’
2.如果您做的小鼠标本的实验,建议您自己根据如下序列,合成b-actin引物:
Forward 5'-TGTGATTGATAGTAGGAAGGTGTGA-3';
Reverse 5'-ACCCAAATCCAAAAATCACG-3'.
3.如果您做的大鼠标本的实验,建议您自己根据如下序列,合成b-actin引物:
Primer F: 5'-TGAGGAATATTTAGAAGGGAT-3'
Primer R: 5'-ACTCTCCAAATACCCACAC-3'
4.快速MS-qPCR试剂盒(型号:A-P-1028)与快速qPCR试剂盒(型号:A-P-1029)有什么区别?
两个试剂盒的引物不同(A-P-1028的引物是β-actin, A-P-1029的引物是GAPDH)。 此外,A-P-1028的Master Mix含有更多的试剂,用于改善富含G-C的DNA区域(通常在亚硫酸氢盐处理后的目标DNA区域看到)。 因此,试剂盒A-P-1028更适用于亚硫酸氢盐DNA扩增。 A-P-1029-快速qPCR试剂盒适用于未修饰DNA的PCR扩增。
5.∆Ct值是什么意思?
Delta Ct值为靶基因Ct减去内控基因(如β-actin) Ct后的Ct值。
6.我目前正在使用终点PCR。 我可以用相同的PCR引物来使用这个试剂盒吗?
是的,试剂盒A-P-1028主要用于实时PCR,但它也适用于使用引物覆盖DNA < 300 bps区域的端点PCR,以获得最佳结果。
7.为了可靠的检测,需要分析多少个CGs ?
至少有一个CG位点应该被正向和反向引物覆盖。 一个CpG岛至少需要覆盖6-10个CpG(长度100- 150bps)。
8.哪种类型的PCR仪与本试验兼容?
任何PCR仪均可与本试剂盒兼容。
9.我还需要购买哪些与此试剂盒相关的产品?
在进行MS-qPCR之前,DNA样本应经过亚硫酸氢盐处理。 我们的DNA甲基化极速修饰试剂盒A-P-1026对亚硫酸氢盐修饰DNA有很好的效果。
10.我不知道如何设计我的引物。 在甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR, MSP)中,是否需要两对引物,一对用于甲基化区域,另一对用于未甲基化区域?
一般来说,针对甲基化区域的一对引物就足以进行MS-PCR。
11.要计算ΔCt,我应该如何使扩增的基因标准化? 我是否应该将甲基化和未甲基化的基因归一化到β-actin管理基因?
是的,β-actin基因可以作为参考(标准化),以确定你的DNA是否被很好地修饰,也可以用来评估PCR扩增效率。
如果DNA经过亚硫酸氢盐处理,该试剂盒用于PCR,甲基化和非甲基化基因都可以用betaglobin(引物应适用于该基因的修改测序)或β-actin(引物包含在试剂盒中)进行归一化。 如果引物对甲基化的DNA序列是特异性的(除CpG位点外,所有的C都被T取代),则未甲基化的基因不会被扩增。 同样,甲基化的DNA也不会被非甲基化DNA序列的特异性引物扩增(所有的C都被T取代,包括CpG位点上的C)。
12.我应该如何分析我的MS-qPCR结果?
通过使用这款试剂盒从qPCR检测中生成的Ct值(周期阈值),可以定量处理与未处理或正常与病变样本之间的相对甲基化水平。 每个样本Ct值首先应与b-肌动蛋白对照Ct值归一化。
13.DNA甲基化qPCR和传统qPCR的区别是什么?MS-qPCR需要特殊引物吗?快速MS-qPCR试剂盒(型号:A-P-1028)是否基于SYBER绿色?
甲基化特异性(MS)-PCR的扩增过程与传统PCR相似,但引物设计不同。我们的快速MS-qPCR试剂盒是一种基于SYBR绿色的扩增方法,用于MS-PCR的引物应该对转换后的DNA序列具有特异性,其中C变为T。
14.采用qPCR原理是如何分析计算DNA甲基化水平的?
甲基化水平的量化策略。(A) 使用标准 DNA 样本进行绝对量化。样本 DNA、对照 DNA(完全甲基化的 DNA 或完全未甲基化的 DNA)和标准 DNA 用 M-primer 或 U-primer 扩增。准确的
甲基化或未甲基化 DNA 分子的准确数量。含有已知数量的 DNA 分子。甲基化水平的计算公式如下:甲基化水平(%)= 100 ×[甲基化 DNA 分子数/(甲基化 DNA 分子数 + 未甲基化 DNA 分子数)]。相对定量:参考基因座和对照 DNA 的相对定量。扩增曲线显示的是具有代表性的 MethyLight 数据。样本 DNA 和对照 DNA(完全甲基化的 DNA)的数量通过通用引物(单引物)和探针进行归一化。
在此条件下,使用甲基化特异性引物(M-引物)和探针比较样本和对照的甲基化 DNA 数量。如图所示,可得到一个 ∆∆Ct 值,并计算出相对甲基化水平。已甲基化和未甲基化的 CpG 位点分别以闭合圆圈和开放圆圈表示。
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