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AATOM™ 550是一种橙色荧光染料，其化学结构与广为人知的罗丹明6G及罗丹明B染料相关。该染料具有强吸收性、高荧光量子产率以及卓越的光稳定性与热稳定性。其表现为中等亲水性，激发波长范围为540-565 nm。AATOM™ 550呈阳离子特性，在与底物偶联后携带+1净电荷。该染料非常适用于单分子检测及高分辨率显微成像技术，包括PALM、dSTORM和STED显微镜，同时与流式细胞术（FACS）、荧光原位杂交（FISH）及多种其他生物检测方法兼容。AATOM™ 550可采用与Cy3®及TAMRA染料相似的激发光源与荧光滤光片进行检测。
NHS酯可在pH 7-9条件下与伯胺基团（如赖氨酸残基侧链或氨基硅烷包被的表面）发生高效选择性反应，形成稳定的共价酰胺键。这一特性使AATOM™ 550 NHS酯成为标记肽段及氨基修饰寡核苷酸的理想选择。对于抗体及其他蛋白质的标记，我们强烈推荐使用具有高水溶性且专为蛋白质标记优化的iFluor®系列染料。
产品优势
AATOM™ 550 NHS酯是一种胺反应性橙光荧光染料，其激发/发射波长为553/574 nm，适用于流式细胞术（FACS）和荧光原位杂交（FISH）等应用。
快速胺偶联： 可与肽段、氨基修饰寡核苷酸及功能化聚合物快速形成稳定酰胺键
高量子产率与稳定性： 提供明亮荧光并具有优异的热稳定性
偶联后呈正电性： 净电荷为+1，可能影响其结合相互作用
适用范围
标记蛋白质、胺修饰寡核苷酸和其他含胺分子
染色样本分析
溶液配制
原液溶液配制：
1.蛋白质原液（溶液A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，pH ~9.0 的 1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如，抗体、蛋白浓度 > 2 mg/mL（如果可能））混合，得到1 mL 蛋白质标记储备液。
注：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，请使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调节至 8.0-9.0 范围。
注意：蛋白质应溶解在 1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)（pH 7.2-7.4）中。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS（pH 7.2-7.4）进行透析，以去除广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白（BSA）抗体或明胶不会被很好的标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得标记结果。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，结合效率会明显降低。为了获得标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。
2.AATOM 550 NHS酯原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 AATOM 550 NHS 酯小瓶中，制成 10 mM 原液。通过移液或涡旋充分混合。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B）。及时使用。延长储存染料原液可能会降低染料活性。溶液 B 在避光、防潮的情况下可在冰箱中保存两周。避免反复冻融。
操作步骤
该标记方案是针对山羊抗小鼠 IgG 与 AATOM 550 NHS 酯的缀合物而开发的。实际情况您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。蛋白质的过度标记可能会对其结合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。
1.进行缀合反应：
1.1 使用摩尔比为 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）作为起点：将 5 µL 染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）添加到小瓶中有效摇动的蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）。假设蛋白质浓度为 10 mg/mL，蛋白质浓度为 ~0.05 mM，蛋白质分子量为 ~200KD。
注意：我们建议使用溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）摩尔比为 10:1 的溶液。如果太少或太高，则分别确定染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2 继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。
2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱纯化染料-蛋白质缀合物的示例。
2.1按照说明书准备Sephadex G-25色谱柱。
2.2将反应混合物（来自“进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 柱的顶部。
2.3当样品刚好流到顶部树脂表面下方时，立即添加 PBS（pH 7.2-7.4）。
2.4向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。合并含有所需染料-蛋白质缀合物的级分。
注意：为了立即使用，染料-蛋白质缀合物必须用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。
注意：为了长期保存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。
3.表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的最重要因素。较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS（例如 DOS > 6）的蛋白质也往往具有减弱的荧光。大多数抗体的 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。为了有效标记，取代度应控制为每摩尔抗体有 6-8 摩尔 AATOM 550 NHS 酯。以下步骤用于确定 AATOM 550 NHS 酯标记蛋白的 DOS。
检测吸收率
要测量染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议根据染料的消光系数将样品浓度保持在 1-10 µM 范围内。
读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料吸光度（对于 AATOM 550 NHS 酯，ƛmax = 574 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 O.D.值范围为 0.1 至 0.9。外径（吸光度）280 nm 是蛋白质的吸收，而 574 nm 是 AATOM 550 NHS 酯的吸收。为了获得准确的 DOS，请确保缀合物不含非缀合染料。
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产品组分
内容
型号
规格 储存温度
AATOM 550 NHS酯 70231 1mg -20°C 操作手册
1 1 常温
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营销中心
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注意事项
保存建议 厂家推荐蓝冰运输。当您收到产品后，按照说明书建议保存于-20°C。 -
FAQ
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Production of genome-edited mice by visualization of nucleases introduced into the embryos using electroporation.
Authors:
Wake, Yui and Kaneko, Takehito
Journal:
The Journal of reproduction and development (2020): 469-473
Surface passivation of zero-mode waveguide nanostructures: benchmarking protocols and fluorescent labels.
Authors:
Patra, Satyajit and Baibakov, Mikhail and Claude, Jean-Benoît and Wenger, Jérôme
Journal:
Scientific reports (2020): 5235
Long-Range Single-Molecule Förster Resonance Energy Transfer between Alexa Dyes in Zero-Mode Waveguides.
Authors:
Baibakov, Mikhail and Patra, Satyajit and Claude, Jean-Benoît and Wenger, Jérôme
Journal:
ACS omega (2020): 6947-6955
Phasor-based widefield FLIM using a gated 512×512 single-photon SPAD imager.
Authors:
Ulku, Arin Can and Bruschini, Claudio and Antolovic, Ivan Michel and Weiss, Shimon and Michalet, Xavier and Charbon, Edoardo
Journal:
Proceedings of SPIE--the International Society for Optical Engineering (2019)
Enhanced Detection of Infectious Pancreatic Necrosis Virus via Lateral Flow Chip and Fluorometric Biosensors Based on Self-Assembled Protein Nanoprobes.
Authors:
Chavan, Sachin G and Kim, Dasom and Hwang, Jangsun and Choi, Yonghyun and Hong, Jong Wook and Kim, Jeongho and Lee, Min-Ho and Hwang, Mintai P and Choi, Jonghoon
Journal:
ACS sensors (2019): 2937-2944
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