NK细胞密度低？

细胞生长缓慢？

达不到理论培养效果？

究竟是哪一步出了问题？

该怎么排查结果不理想的原因？

实际上，在进行NK细胞的培养实验时，影响最终实验结果的因素非常多。为了帮助客户解决问题，我们根据以往经验总结，为大家整理了实验过程中最容易被大家忽视但却极易影响实验结果的四个关键点，希望大家实验路上能够顺风顺水！

一、采血环节需注意

（1）为了避免抗凝剂占比过高影响自体血浆的使用，应使脐血中的抗凝剂占比低于30%。如用采血袋采集血样，建议使用100mL容量的采血袋。如果采血时用200mL采血袋，建议取出14mL 抗凝剂。

（2）因为EDTA会影响NK细胞的激活与扩增，采集血样时禁止使用 EDTA 抗凝的真空采样管，可以选用肝素钠抗凝的真空采血管。

二、无血清培养基配制与补液

（1）高性能版培养基配制

激活培养基：200mL基础+200uL YC00C。第0天配。D0-D5使用。

扩增培养基：1.8L基础+1.8mL YC005。第7天配。D7开始使用。

（2）标准版培养基配制

培养基A：基础培养基+YC005，第0天配。D0及D9后使用。

培养基B：基础培养基+YC005+YC00C，第3天配。D3-D9使用。

（3）每次补液时添加的培养基需预温，用多少取多少，禁止将整瓶培养基预温、禁止反复预温。

（4）培养基现配现用，配成完全培养基后4°C保存。

三、无血清培养基配制与补液

（1）使用TC处理水平较高的贴壁细胞培养瓶，2L体系套装建议以2个T25瓶起始培养。

（2）尽可能使用大体积的培养袋，促进细胞间的气体交换，防止代谢废物过多影响细胞增殖。如采用1L培养体系，推荐使用2L培养袋；采用2L培养体系，推荐每个1L体系使用1.8L培养袋。

（3）刚入袋时，一般细胞培养袋大而细胞液体积小，建议将培养袋对折使用（d7），选择合适的底面积培养。

（4）接种密度

外周血的推荐接种密度为1.5-2E6cells/mL。脐血UCBMC的推荐接种密度为2.5-3E6cells/mL。

四、避免细胞机械损伤

（1）细胞接种后，第1-3天会形成悬浮细胞小团，第3-5天绝大部分悬浮细胞团贴壁，不可将其晃起，第5-7天贴壁的细胞团变大、变多，这些都是正常的细胞形态。

（2）培养前期一定不要吹打细胞团（D0-D5），以减少细胞机械损伤。

注：高性能版产品对实验人员标准操作要求更为严格，对试剂盒稳定性更为敏感，完全培养基切忌反复预温，接种密度可大不可小。有任何实验操作前后的疑问都可同厂家技术人员沟通。

◆NK培养基产品选型指南◆

我们的NK细胞无血清培养基套装5.0最主要的特点就是支持全样本、全场景的培养，您可以根据不同的培养需求而选择不同版本的产品，参考依据如下：