青少年时期间歇性饮酒会导致成年后行为发生持久变化，并改变前额叶皮质中的基因表达和组蛋白甲基化
发布时间：
2025-12-25 15:43
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编辑:
格雷格·E·霍马尼克斯，
美国匹兹堡大学
审阅:
约翰·J·伍德沃德，
美国南卡罗来纳医科大学，
美国
布莱恩·麦库尔，
美国维克森林医学院
*通信:
詹妮弗·T·沃尔斯坦霍姆 jennifer.wolstenholme@vcuhealth.org
收稿日期:2017年7月11日
录用日期:2017年9月12日
发表日期:2017年9月26日
引用:
沃尔斯滕霍尔姆JT、马哈茂德T、哈里斯GM、阿巴斯S和迈尔斯MF(2017年)青少年时期间歇性饮酒会导致成年后行为发生持久变化，并改变前额叶皮质中的基因表达和组蛋白甲基化。《分子神经科学前沿》10:307。doi:10.3389/fnmol.2017.00307
青少年时期间歇性饮酒会导致成年后行为发生持久变化，并改变前额叶皮质中的基因表达和组蛋白甲基化
詹妮弗·T·沃尔斯滕霍尔姆 、塔里克·马哈茂德 、盖伊·M·哈里斯 、沙赫罗兹·阿巴斯 和迈克尔·F·迈尔斯
美国弗吉尼亚州里士满弗吉尼亚联邦大学药理学与毒理学系， 美国弗吉尼亚州里士满弗吉尼亚联邦大学VCU酒精研究中心，3美国弗吉尼亚州里士满弗吉尼亚联邦大学人类与分子遗传学系
青少年主要通过暴饮暴食的方式饮酒，这对发育中的额叶皮质可能特别有害，并会增加成年后患酒精使用障碍的风险。我们进行了一项研究，调查前额叶皮质(PFC)转录组的即时和长期变化，以确定青少年暴饮乙醇后成年期乙醇行为敏感性的分子机制。从第29天到第42天，对DBA/2J小鼠间歇性口服 乙醇。使用翻正反射消失任务测试青春期小鼠的焦虑样行为和乙醇敏感性。成年后，使用新物体识别任务、乙醇诱导的抗焦虑和乙醇敏感性测试小鼠的认知变化。青少年暴饮乙醇会改变幼鼠的乙醇敏感性，并导致物体识别测试中的持久记忆缺陷以及成年后更高的乙醇敏感性。通过对PFC中的转录本进行基因组分析，我们发现暴饮乙醇会降低髓鞘相关基因的表达，并改变参与H3K9和H3K36组蛋白去甲基化的染色质修饰基因。我们假设乙醇对组蛋白甲基化的作用可能是未来转录变化的一个开关，这些转录变化是导致持续到成年期的行为变化的基础。
关键词:青少年、乙醇、基因组学、前额叶皮质、表观遗传学
引言
酒精是青少年中最常被滥用的麻醉剂，有870万未成年青年报告在过去一个月内饮酒(行为健康统计与质量中心，2014年)。值得注意的是，21岁以下美国青年饮用的酒精中有90%是狂饮形式，即在几小时内饮用四杯或更多杯酒(行为健康统计与质量中心，2014年)。青少年狂饮会增强对酒精奖励方面的敏感性，并降低对其厌恶作用的敏感性，使青少年能够饮用更多酒精且中毒的负面影响更小(斯皮尔，2000年)。乙醇奖励和厌恶作用平衡的这种转变可能会增加发展为酒精使用障碍(AUD)的风险。事实上，饮酒的早发年龄会使成年后患AUD的风险增加近四倍(格兰特和道森，1997年；格兰特，1998年)。
青少年饮酒可能特别有害，因为它可能会延迟或扰乱关键的正在进行的神经发育，对成人大脑结构、连接和功能产生深远影响。特别是，前额叶皮质(PFC)是一个在青春期结构和突触连接发生巨大变化的脑区(斯皮尔，2000年)，并且在接触乙醇时会出现分子和结构改变(德贝利斯等人，2005年； Pfefferbaum等人，2006年； Medina等人，2008年； Kroenke等人，2014年)。PFC还对其他介导接近并积极强化药物寻求的脑区以及介导厌恶并消极强化药物寻求的脑区发挥重要的自上而下或执行控制作用(彼得斯等人，2009年；库布和沃尔科夫，2010年)。这些结构之间连接的改变或执行控制的缺陷可能会导致对注意力和情绪的控制丧失，并可能导致更多地参与危险行为，如狂饮。青春期正在进行的额叶皮质髓鞘形成和突触修剪可能使狂饮者特别容易受到长期后果的影响，如乙醇敏感性增加、致敏、饮酒量增加和长期认知缺陷(斯皮尔，2000年；科尔曼等人，2014年；巴尔加斯等人，2014年；博德特等人，2016年)。
青少年期或成年期接触乙醇，通常与额叶皮质白质减少、皮质萎缩和认知障碍有关。白质降解(巴瓦等人，2013年；卢西亚娜等人，2013年)以及髓磷脂基因和蛋白质表达紊乱，在酗酒者的额叶、运动和边缘脑区经常被发现(勒沃尔等人，2000年)。在患有酒精使用障碍(AUD)的青少年中，神经影像学研究表明，额叶皮质白质减少与乙醇摄入量增加有关(德贝利斯等人，2005年)。在成年C57BL/6J或DBA/2J小鼠中，急性或慢性乙醇暴露会导致前额叶皮质(PFC)基因表达发生显著变化，包括多个与髓磷脂相关的基因(克恩斯等人，2005年；法里斯和迈尔斯，2013年)。青少年期暴饮乙醇的啮齿动物模型也显示出额叶神经变性(克鲁斯等人，2000年)、神经发生丧失(克鲁斯等人，2006年)、髓磷脂纤维密度降低(蒙特西诺斯等人，2014年；巴尔加斯等人，2014年)以及成年期基底前脑和其他区域体积减小(科尔曼等人，2011年；加斯等人，2014年)。青少年期间歇性接触乙醇会导致逆向学习能力缺陷(科尔曼等人，2014年)和新物体识别能力缺陷(蒙特西诺斯等人，2014年)。在大鼠中，青少年期慢性间歇性接触乙醇会损害成年期的识别记忆(帕斯夸尔等人，2007年；韦特雷诺和克鲁斯，2015年)。总之，这些数据表明，青少年期接触乙醇会给大脑结构和功能带来持久变化，尤其是在前额叶皮质和髓磷脂方面。然而，这些乙醇诱导的改变的发展背后的分子机制，以及它们如何导致持久的行为变化，仍然难以捉摸。
乙醇暴露还会通过对染色质和组蛋白的表观遗传修饰导致基因转录调控的变化。组蛋白的表观遗传修饰对基因表达有正向和负向调节作用，可能是长期认知缺陷和对乙醇行为敏感性的潜在机制之一。事实上，青少年间歇性乙醇暴露会导致杏仁核中央核(Kyzar等人，2016年)、前额叶皮质(Pascual等人，2012年)中组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化和组蛋白去乙酰化酶表达的整体改变。全身给予组蛋白去乙酰化酶抑制剂可减轻焦虑样行为并增加乙醇消耗(Pandey等人，2015年)，并增强乙醇条件性位置厌恶的获得、消退和恢复(Pascual等人，2012年)。成年人不受HDAC抑制的影响(Pascual等人，2012年；Pandey等人，2015年)，这表明青少年乙醇暴露的持久行为反应可通过染色质调控来调节。
目前尚不清楚乙醇诱导的前额叶皮质(PFC)发育持续性变化的分子机制。我们假设青少年期乙醇会导致PFC基因表达网络的持续性改变，从而导致青少年期和成年期的行为改变。在此，我们使用DBA/2J小鼠的青少年期暴饮乙醇暴露模型来评估青少年期和成年期的行为反应。我们通过在青少年期和成年期对PFC进行全基因组表达谱分析以及对全局组蛋白甲基化进行表观遗传学研究，来探究这些已确定变化的分子基础。我们的研究发现，青少年期乙醇暴露会引发截然不同的即时和持久转录反应，并表明组蛋白甲基化的改变与青少年期乙醇的持久行为反应有关。
材料与方法
动物
来自杰克逊实验室的雄性和雌性DBA/2J小鼠于出生后第22天抵达弗吉尼亚联邦大学动物饲养室(美国缅因州巴尔港)。使用DBA/2J小鼠是因为它们对急性乙醇有强烈的行为反应(Dudek等人，1991年；Phillips等人，1994年；Linsenbardt等人，2009年)，并且与更常用的C57BL6小鼠相比，成年后急性乙醇处理后髓鞘相关基因表达的变化更明显(Kerns等人，2005年)。我们关注对急性乙醇的行为反应，因为个体对急性乙醇的反应水平是发展为酒精使用障碍(AUD)风险的公认预测指标(Schuckit和Smith，1996年)。小鼠在AALAC认证的设施中按性别4只/笼饲养，处于12小时光照/黑暗周期，整个实验期间自由提供食物和水。在适应动物设施一周后，小鼠在出生后第27天和28天用0.1%糖精适应灌胃程序，然后分为两个治疗组:乙醇处理组和对照组。在实验1中，DBA/2J雄性 和雌性 在出生后第29、30、33、34、37、38、41和42天通过灌胃间歇性地给予 乙醇(25%w/v溶于水)或水(2天给药/2天停药)。在此剂量下，灌胃后血液乙醇浓度达到 (出生后第33天的 雄性)。这些水平与先前发表的用于模拟青少年暴饮乙醇并显示髓鞘缺陷的C57BL/6小鼠的水平相似(Coleman等人，2011年；Montesinos等人，2014年)。然后将小鼠随机分为两组，并作为幼崽或成年动物进行乙醇敏感性行为测试。作为幼崽，小鼠在出生后第43天，即最后一次乙醇给药后24小时，测试基础焦虑样行为，然后在出生后第47天测试对高剂量乙醇的镇静作用。成年小鼠(出生后第66天及以上)用新物体识别测试、乙醇诱导的抗焦虑作用和对乙醇的镇静作用测试记忆缺陷。行为测试至少间隔4天。
在实验2中，另一组DBA/2J雄性和雌性( )与实验1完全相同地间歇性给予乙醇处理，但不进行行为测试。在出生后第43天(n = 22)和出生后第66天(n = 19)收集组织进行基因表达研究。在两个实验中，由于灌胃相关问题损失了14只小鼠(5只对照组和9只乙醇处理组小鼠)。根据梳理行为、外观和进食情况，所有存活的动物看起来都正常。鉴于本研究的目的不是检查青春期暴饮乙醇长期影响的激素调节，雌性小鼠的发情周期未得到控制或监测。所有动物的饲养和护理均在弗吉尼亚联邦大学IACUC委员会的批准下进行，并符合美国国立卫生研究院《实验动物饲养和使用指南》(国家研究委员会，2011年)。
明暗箱中的焦虑样行为
在出生后第43天，对小鼠进行最后一次乙醇/水灌胃给药后，检测其焦虑样行为的差异 ，以评估乙醇戒断可能引起的焦虑。使用来自Med Associates(美国佛蒙特州圣奥尔本斯)的标准商用仪器(Med Associates)进行焦虑样行为的明暗箱冲突模型实验，该仪器有一个开放场地 ，由黑色塑料隔板分为大小相等的亮区或暗区，中间有一个开口以允许明暗转换。通过红外光束中断监测动物的位置和运动活动。在行为室适应1小时后，将小鼠置于亮室中央，面向暗室入口。实验包括一个5分钟的测试期，一旦动物进入暗区即开始。焦虑样指标以在亮区花费的时间百分比和在亮区移动的距离百分比来报告，以控制运动活动。任一指标的增加都被解释为焦虑样行为减少。
在青春期接受乙醇或水灌胃的不同动物组中，在出生后第66天对小鼠进行明暗模型中急性乙醇诱导的抗焦虑测试。在行为室适应1小时后，给小鼠注射 乙醇 或0.9%生理盐水。将小鼠放回其笼中5分钟，以避免在DBA/2J小鼠中常规观察到的乙醇运动激活阶段。然后如上所述测量5分钟的明暗箱焦虑样指标和总运动距离。
翻正反射消失(LORR)
在测试室适应1小时后，给小鼠腹腔注射镇静/催眠剂量的乙醇 ，然后放回笼中，直到它们出现翻正反射消失(LORR)，定义为在V形槽中仰卧后 内无法自行翻正三次。LORR通过从恢复时间中减去LORR开始时间来计算(Costin等人，2013年)。
新物体识别
我们使用新物体识别任务来测量前额叶皮层介导的识别记忆(Warburton和Brown，2015年)。新物体识别(NOR)包括两个阶段，训练阶段和测试阶段，中间间隔5分钟或1小时。在NOR任务前 1天，将小鼠置于测试笼中适应。在测试当天，将小鼠置于测试室适应 ，然后置于测试笼中适应 。在训练阶段，将两个相同的物体放置在一个空的干净小鼠笼的对角。让小鼠与每个物体互动5分钟，然后放回其笼中进行延迟期。一半小鼠进行5分钟延迟测试以测量前额叶皮层依赖的短期记忆。另一半小鼠进行1小时延迟测试以测试更长时间的、嗅周皮层介导的识别记忆(Seamans等人，1995年；Warburton和Brown，2015年)。在延迟期，将一个熟悉的物体换成一个大小相似的新物体。然后将小鼠放回测试场地，让它们探索两个物体。记录鼻子朝向物体 的近距离接触时间。评分者对小鼠的性别和处理不知情。通过将与新物体互动的时间减去与熟悉物体互动的时间，再除以总互动时间来计算辨别指数。未能遵循其天生的对新事物的探索倾向而花更多时间与新物体互动被解释为识别记忆受损和前额叶皮层功能障碍(Weitzel等人，2015年)。任何在训练期间未对物体进行超过 探索的小鼠都不用于分析。因此，在1小时测试中有两只小鼠被排除。
RNA分离
实验2中，使用STAT 60试剂(Tel-Test，美国德克萨斯州弗里斯特伍德)和RNeasy微型试剂盒(Qiagen，美国加利福尼亚州瓦伦西亚)，按照制造商的方案从PFC中分离总RNA。通过在 处的吸光度测定RNA浓度，并通过Experion自动电泳(Bio-Rad，美国加利福尼亚州赫拉克勒斯)和28S:18S比率评估RNA质量。所有RNA的RQI值均为 ，260/280比率在1.9至2.1之间。
微阵列处理与
##生物信息学
按照所述方法(Wolstenholme等人，2011b)，使用Affymetrix的标准试剂盒和方案，对单只小鼠的前额叶皮质RNA进行逆转录并标记，用于微阵列杂交。将标记的cDNA与GeneChip®小鼠转录组阵列(MTA v 1.0； )杂交。每个阵列都经过质量控制、使用Expression Console和转录组分析中心(TAC，Affymetrix)进行标准化，以及先前建立的生物信息学管道(Wolstenholme等人，2011b)处理。两个微阵列(一个PND 43对照雌性和一个PND 66对照雌性)未通过质量控制检查，显示信号强度低，表明杂交不佳，未用于本分析。使用两种单独的分析方法sstRMA和S评分分析确定差异基因表达。来自两个年龄组的阵列同时运行，但对每个年龄组分别进行差异表达分析。使用Expression Console(Affymetrix，美国加利福尼亚州圣克拉拉)生成信号空间变换RMA(sstRMA)信号。由于TAC程序不执行所需的双向方差分析，因此使用Bioconductor套件(Irizarry等人，2003)中的limma包(Ritchie等人，2015)在每个年龄生成具有处理和性别因素的差异表达。在未校正的 处调用显著差异表达的转录本ID。使用显著性评分(S评分)算法(Zhang等人，2002；Kennedy等人，2006)进行第二次分析，该算法针对MTA阵列进行了修改，以确定乙醇反应性基因表达。该算法通过计算处理和对照样品之间探针配对强度的相对变化，并将探针信号转换为具有均衡误差的多个测量值，在探针水平上比较处理和对照样品之间的基因表达谱，这些测量值针对给定基因(转录本簇)的所有探针求和以形成显著性评分(S评分)。S评分在所有转录本ID上遵循标准正态分布，均值为 ，标准差为 。然后通过错误发现方法(SAM)评估S评分是否显著偏离正态分布。为每个性别生成乙醇处理与对照的成对 评分，并对每个生物学重复进行平均。因此，为青少年数据生成了九个乙醇反应性S评分(5只雄性和四只雌性)，为成年人生成了九个 评分。数据按性别合并以提高功效并关注与年龄相关的差异。使用单类SAM(Saeed等人，2003)在FDR < 0.05时确定显著差异表达的 评分。
使用先前建立的管道(Wolstenholme等人，2011b，Wolstenholme等人，2013)进行生物信息学分析，包括使用ToppGene Suite中的ToppFun工具套件(Chen等人，2009)对基因本体(GO)进行功能过度表达分析，以进行基因列表富集分析。使用Ingenuity Pathway Analysis 进行候选基因优先级排序和基因网络映射(Wolstenholme等人，2011b，2013；Costin等人，2013；Farris和Miles，2013；Harenza等人，2014)，以根据当前科学文献评估这些基因之间的生物学意义和关系。
##定量实时PCR
为了验证候选基因的微阵列结果，使用iScript cDNA试剂盒(美国加利福尼亚州赫拉克勒斯市伯乐公司)将实验2中的前额叶皮质总RNA逆转录为cDNA。使用CFX系统(伯乐公司)按照标准方案(Wolstenholme等人，2011a，2012，2013)进行基于SYBR Green的实时PCR检测。生物重复样本进行三次重复实验。使用提供的软件根据每个孔的阈值循环 计算候选基因表达水平的定量，并以内源性对照PPP2r2p、Ublcp1和B2M进行标准化。基因表达的相对变化以内源性对照PPP2r2p、Ublcp1和B2M进行标准化。基因表达的相对变化以对照雄性组为参照进行标准化。
全局组蛋白甲基化
为了验证组蛋白甲基化的微阵列结果，如实验2所述，在青春期对另一组小鼠进行乙醇处理。在出生后第43天( 组)，使用总组蛋白提取试剂盒(美国纽约州法明代尔市Epigentek公司)按照制造商说明从青春期前额叶皮质组织中提取组蛋白。使用EpiQuik全局泛甲基化组蛋白H3-K9和H3-K36定量试剂盒(美国纽约州法明代尔市Epigentek公司)按照制造商方案通过比色ELISA测定法测定H3K9和H3K36的全局蛋白甲基化水平。使用分光光度计在 处测定吸光度。按照制造商说明使用标准曲线计算结果，蛋白水平以ng/μg表示。
统计学分析
行为学检测、定量rtPCR表达数据和组蛋白甲基化数据使用双向方差分析进行分析，将处理和性别作为因素，随后进行Student-Newman-Keuls事后检验以确定显著性。 值小于0.05被认为具有显著性。使用三向方差分析分析明暗箱中乙醇诱导的抗焦虑作用，并进行SNK事后检验。用于基因组表达数据的统计和生物信息学方法如上所述。
结果
青春期暴饮乙醇不会改变体重
青春期对DBA/2J小鼠进行暴饮乙醇处理在处理期间未显著改变体重。在整个处理过程中，所有组的体重均显著增加[时间的主效应，实验1: ， ；实验2: ]。双向重复测量方差分析仅显示雄性和雌性之间体重存在显著差异[实验1: ；实验2: ， ]。未发现处理有影响[实验1雄性: ，雌性: ， ；实验2:雄性 ，雌性 ]。
www.ingenuity.com
青春期暴饮乙醇增加运动活性但不改变基础焦虑水平
在最后一剂乙醇给药24小时后，DBA/2J青少年小鼠在明暗试验中的焦虑样行为并未因乙醇暴露而改变。各治疗组之间在明箱中的停留时间百分比 和在明箱中移动的距离百分比 没有显著差异(图1)，不同性别之间也无显著差异[停留时间百分比: ，移动距离百分比: ， ]。然而，乙醇暴露的青少年小鼠的运动活动显著增加。乙醇暴露小鼠的总移动距离和行走时间显著增加[治疗的主要效应: 和 ]。尽管雄性和雌性之间没有差异，但暴露于乙醇的雄性和雌性小鼠的运动活动均显著增强(总距离分别增加54%和77%)，行走时间也显著增加(分别增加43%和72%)。
青少年期乙醇暴露降低对高剂量乙醇的敏感性
青少年期间歇性暴饮乙醇会降低DBA/2J雄性和雌性小鼠在出生后第46天对乙醇的镇静/催眠反应。各治疗组 和不同性别之间失去翻正反射的潜伏期相似[图2A， ]。然而，从出生后第29天至42天用 乙醇灌胃治疗可缩短翻正反射消失试验中的镇静时间(图2B)。我们发现，对于DBA/2J小鼠，治疗对翻正反射消失持续时间 存在显著的主要效应，但性别 或性别与乙醇治疗之间的交互作用 没有显著效应。有乙醇暴露史的DBA/2J青少年雄性和雌性小鼠的睡眠时间分别减少了20%和22.7%。
青少年期暴饮乙醇会损害成年期的记忆
为了评估在额叶皮质发育期间暴饮乙醇的长期影响，我们使用新颖物体识别测试(Warburton和Brown，2015年)测量了“前额叶皮质介导的”短期记忆和“鼻周/海马介导的”长期记忆。在青春期暴露于暴饮乙醇的DBA/2J成年小鼠中，在5分钟延迟后，乙醇暴露的雄性和雌性小鼠的识别记忆均下降[图3A， 。在1小时延迟后，仅发现识别记忆下降的趋势受乙醇暴露影响，主要由雌性驱动[图3B， 。在任何一个间隔延迟中，我们都未发现性别有显著影响[5分钟延迟: 和 延迟: ， 。我们也未发现处理和性别之间有显著交互作用[5分钟延迟: 和1小时延迟: 。总之，这些数据表明，DBA/2J小鼠青春期暴饮乙醇可能会选择性地损害额叶皮质连接，因为在短(5分钟)而非长(1小时)延迟后新颖物体识别下降。我们可能还发现了一种性别特异性效应，即青春期乙醇对雌性的影响比雄性更强。在训练期间对物体进行调查的时间上，各组之间没有显著差异 ，数据未显示)。
成年小鼠青春期乙醇对乙醇诱导的抗焦虑作用无影响
在成年小鼠中，与对照组相比，青少年期暴露于暴饮乙醇的小鼠在腹腔注射生理盐水或乙醇(2.0 g/kg)后，在明暗箱中的焦虑样行为相似。光照区的时间百分比和距离在性别之间没有显著差异[时间: ；距离: ]，或在青少年治疗组之间也没有显著差异[时间: ；距离: ， ]。与生理盐水处理相比，急性乙醇( 腹腔注射)显著增加了光照区的时间百分比 和行进距离 ，表明乙醇具有显著的抗焦虑样反应(图4)。青少年期之前的乙醇暴露与这些指标没有相互作用。然而，在实验过程中，急性乙醇处理的小鼠的总行进距离显著高于生理盐水处理的小鼠[明暗箱处理的主效应， ]。青少年运动激活的一些特征可能会持续到成年期。当在成年期于明暗箱中进行测试时，与生理盐水处理的小鼠相比，暴露于青少年暴饮乙醇的小鼠在注射急性 乙醇后表现出增加的运动活性[图4C，青少年暴露的主效应， ]。所有三个因素[青少年暴露、明暗箱处理和性别； ]之间的显著相互作用表明，在乙醇处理的成年小鼠中，暴露于暴饮乙醇的雌性小鼠比对照雌性小鼠具有更大的运动能力，而雄性小鼠则没有。
青少年暴饮乙醇会增加成年期对乙醇的敏感性
在最后一次乙醇暴饮三周后，与对照组相比，青少年期暴露于乙醇的小鼠对高剂量乙醇的镇静/催眠作用更敏感。治疗组之间失去翻正反射的潜伏期相似 ，但雌性小鼠的潜伏期更短[图5A， ]。在成年小鼠中，青少年期乙醇预处理增加了翻正反射丧失试验中的镇静时间。在有乙醇暴露史的成年雄性和雌性小鼠中，睡眠时间分别增加了6.5%和36.9%(图5B)。我们发现治疗对翻正反射丧失持续时间有显著的主效应 ，性别有显著效应 ，但两者之间没有显著的相互作用 ， 。总体而言，雌性小鼠的翻正反射丧失持续时间比雄性小鼠短。
图1 | 青春期暴饮乙醇会增加青春期的运动活动。在出生后第43天最后一次给予乙醇剂量24小时后，在明暗箱实验中，乙醇处理并未改变在明处的时间百分比(A)或在明处移动的距离百分比(B)(每组n = 7 - 10)。在5分钟测试中，暴露于乙醇的雄性和雌性小鼠的走动时间(C)和总运动距离(D)显著增加。数据表示为平均值±标准误。* ，双向方差分析的处理主效应。
图2 | 青春期乙醇降低青春期DBA/2J小鼠对乙醇的敏感性。(A)高剂量乙醇处理后，DBA/2J雄性小鼠(每组n = 9)和雌性小鼠(每组n = 6 - 7)失去翻正反射的时间相似。(B)在出生后第46天，暴饮处理的雄性和雌性小鼠在高剂量乙醇处理后均表现出较短的翻正反射消失时间。数据表示为平均值±标准误。* ，双向方差分析的处理主效应。
前额叶皮质的基因组表达分析揭示青少年髓鞘形成和组蛋白甲基化的变化
在实验2中，在最后一次乙醇暴饮后 (出生后第43天)和3周(出生后第66天)收集前额叶皮质未经历过行为实验的组织。使用小鼠转录组阵列v1.0分析总RNA的基因水平表达差异。进行了两项互补分析以探究每个年龄的差异基因表达。在最后一次乙醇暴饮24小时后，在limma中使用双向方差分析，以处理和性别作为因素，在 时，493个转录本ID作为处理的主效应有显著改变(补充表1)。393个转录本ID因性别有显著改变，244个转录本ID在处理和性别的相互作用中有差异表达(补充表1)。基因本体过度表达分析确定了六个与少突胶质细胞发育和髓鞘形成相关的类别，作为青春期暴饮乙醇改变的主要生物学过程(补充表2)。对于性别和青春期处理相互作用显著的转录本ID，基因本体分析仅确定了两个过度表达的细胞成分:内质网伴侣成分和平滑内质网。当比较青春期雄性与雌性之间的基因表达时，大多数差异表达基因要么位于Y染色体上(Ddx3y、Eif2s3y、Kdm5d、Uty)，要么已知在小鼠中逃避X染色体失活(Ddx3x、Eif2s3x、Kdm5c、Kdm6a)(Yang等人，2010年)。过度表达的基因本体类别(补充表2)反映了它们的过程，如组蛋白去甲基酶活性、血液中的血管紧张素分解过程、细胞粘附和间隙连接组装的调节。
图3 | 青春期暴饮乙醇后成年小鼠的识别记忆受损。在训练和测试之间延迟5分钟后(A)，暴露于乙醇的DBA/2J成年小鼠( 组)的辨别指数为零或负数，表明无法识别新物体或无法记住熟悉物体。在延迟1小时后(B)，DBA/2J成年雌性小鼠有辨别指数降低的趋势。数据表示为平均值±标准误。* ，双向方差分析的处理主效应。 ，处理有显著效应的趋势。
在成年小鼠中，青春期暴饮暴食乙醇会在 改变626个转录本ID(补充表3)。256个转录本ID因性别主效应而显著改变，242个转录本ID因处理与性别的相互作用而显著改变(补充表3)。基因本体分析仅确定了两个过度代表的分子功能作为处理主效应的显著过度代表:β-连环蛋白结合和转录因子活性(补充表4)。成年小鼠性别主效应的基因本体比较主要揭示了由于位于Y染色体上或逃脱X染色体失活的赖氨酸去甲基化酶导致的氧化还原酶活性和组蛋白去甲基化酶活性的变化(补充表4)。成年小鼠青春期乙醇处理与性别的相互作用揭示了许多显著过度代表的GO类别，这些类别差异很大，包括脂质结合、炎症反应、ERK级联调节、囊泡介导运输调节以及学习和记忆。
我们使用 评分探针水平算法进行了第二次分析，我们之前已证明该算法在差异表达分析中具有更高的灵敏度(Zhang等人，2002年；Kennedy等人，2006年)。对于此分析，数据按性别合并，以提高检测乙醇处理与对照之间差异的能力，并关注暴饮暴食乙醇后的持久差异。在青少年中，在最后一剂乙醇后 ，PFC中有1812个转录本ID因乙醇而显著改变(补充表5)。重要的是，在TAC/limma分析中因暴饮暴食乙醇而显著改变的493个转录本ID中的300个也包含在 评分结果中。这些包括上述所有与髓磷脂相关的基因。 评分结果的基因本体分析还确定了一组非常紧密的显著过度代表的分子功能和与组蛋白去甲基化酶活性相关的生物学过程，特别是在H3K9和H3K36残基处(补充表6)。 Ingenuity通路分析确定了两个包含许多这些组蛋白去甲基化酶的新网络(补充图S1)。
在成年小鼠中，在最后一次暴饮暴食乙醇3周后，使用S评分算法，有1553个转录本ID因乙醇而显著改变(补充表5)。只有少数GO类别显著过度代表(补充表6)。这些主要涉及谷氨酸受体信号传导，特别是在AMPA受体处、RAS信号转导调节和突触信号传导。 Ingenuity通路分析的顶级新网络(补充图S2)包含了青春期暴饮暴食乙醇后成年大脑中下调的8个与AMPA相关基因中的7个。
为了评估青春期暴饮暴食乙醇后长期持续调控的基因，我们将青少年中因乙醇而显著改变的S评分分析基因列表与从成年小鼠获得的列表进行了交叉。令人惊讶的是，两个年龄组之间只有49个转录本ID相同(补充表5)。这些基因主要涉及RNA聚合酶II激活转录因子结合、胞质钙调节和细胞凋亡的负调节是主要主题。 Ingenuity通路分析确定了与GO分析类似的经典通路，包括G蛋白偶联受体信号传导和cAMP介导的信号传导(补充表6)。
青春期暴饮暴食乙醇会降低与髓磷脂相关的基因表达
S评分分析和TAC双向方差分析都包含300个在青春期动物治疗反应中相同的转录本ID。其中，在这两种分析中，四个髓鞘相关基因Mag、Mbp、Mobp和Plp均显著降低。我们使用qPCR证实了在青春期雄性和雌性动物暴饮乙醇后这些髓鞘相关基因表达的降低(图6A)。在青春期前额叶皮质中发现了髓鞘相关基因表达的性别差异。雌性Mag 、Mal 和Ndrg1 的表达低于雄性。青春期暴饮乙醇显著降低了Mag 、Mbp 、 、Mobp 和Plp 的表达。在Mag 、Mbp 和Plp 中发现治疗和性别之间存在显著相互作用，乙醇暴露雄性的表达低于对照雄性，因此对雄性的影响似乎更强。在我们的微阵列分析中未被乙醇显著改变的两个髓鞘相关基因Mal和Ndrg1的表达，在暴饮乙醇后使用qPCR也未改变[Mal: 和Ndrg1: ， 。为了观察这些基因表达变化是否持续存在，我们还在PND66时通过qPCR检测了成年前额叶皮质中的髓鞘表达。青春期乙醇暴露未显著改变任何髓鞘相关基因的表达[Mag: ；Mal: 、Mbp: ；Mobp: 、Ndrg1: ；和Plp: ]，也未改变性别之间的表达[Mag: 、Mal: 、Mbp: 、Mobp: 、Ndrg1: ；和Plp: ， ；图6B]，这与微阵列结果一致。
图4 | 暴饮乙醇不会改变成年期乙醇诱导的抗焦虑作用。与成年期接受生理盐水处理的小鼠相比 ，乙醇(腹腔注射2 g/kg)显著增加了在明室中的停留时间(A)和在明室中的行进距离(B)。性别差异或先前接触乙醇并未改变明暗箱中的焦虑样行为。(C)在任务期间，乙醇处理的小鼠的总行进距离更高。青春期曾接触乙醇的雌性小鼠的运动活性显著高于所有其他组。数据以平均值±标准误表示。* ，乙醇注射的主效应，通过三因素方差分析得出。 ，青春期接触、乙醇注射和性别的相互作用，通过三因素方差分析得出。
暴饮乙醇可降低H3K36的组蛋白甲基化
由于在接触乙醇的青春期小鼠中，参与组蛋白去甲基化酶活性(特别是H3K9和H3K36处)的基因减少，我们在另一组小鼠中对H3K9和H3K36处的单甲基化、二甲基化和三甲基化的整体组蛋白甲基化蛋白水平进行了定量(图7)。在出生后第43天，即最后一次灌胃处理后24小时，与对照雄性小鼠相比，乙醇处理的雄性小鼠中所有三种H3K36甲基化蛋白水平均显著降低[显著相互作用:H3K36me ， H3K36me2 H3K36me3 。青春期暴饮乙醇未改变H3K9单甲基化、二甲基化或三甲基化的整体水平[H3K9me ；H3K9me ， 。
讨论
青少年早期饮酒经历会持久改变大脑结构。改变乙醇的行为特性，并可能增加患酒精使用障碍的风险。进行这些研究是为了开始确定发育中的前额叶皮质在暴饮乙醇后发生的分子变化，并确定在成年大脑中持续存在的分子变化。这项工作是对前额叶皮质基因表达对青少年暴饮乙醇反应的首次全基因组分析。我们报告，青春期的暴饮乙醇会降低前额叶皮质中与髓鞘相关的基因表达以及参与组蛋白甲基化的基因表达。在成年期，青春期接触暴饮乙醇的小鼠的前额叶皮质中谷氨酸信号传导减少。有趣的是，在最后一次暴饮乙醇后，一些参与G蛋白信号传导的转录本在成年期持续发生变化。这些基因表达谱与乙醇行为反应中的差异相关。
在通过灌胃反复给予青春期乙醇的小鼠中，我们注意到乙醇行为敏感性出现了即时和持久的变化(图2、5)。与先前的报告(Hefner和Holmes，2007年；Linsenbardt等人，2009年；Broadwater等人，2011年)相似，在翻正反射丧失任务中，青春期DBA/2J雄性和雌性小鼠对暴饮乙醇后的乙醇镇静/催眠作用不太敏感。先前暴露于暴饮乙醇的成年小鼠比对照组更敏感，恢复时间更长。与成年小鼠相比，青春期大鼠和小鼠在高剂量乙醇后镇静时间较短，对镇静/催眠作用不太敏感(Hefner和Holmes，2007年；Linsenbardt等人，2009年；Broadwater等人，2011年)。这些发育差异归因于未接触过乙醇的DBA/2J小鼠中乙醇药代动力学的差异(Linsenbardt等人，2009年)。然而，并非总能发现青春期与成年期乙醇代谢的差异(Hefner和Holmes，2007年)。我们在模型中未测量乙醇药代动力学，因此我们不能排除乙醇代谢中与年龄相关的差异或反复暴饮暴露导致的潜在耐受性是造成这些乙醇镇静差异的原因。我们也未比较雄性和雌性之间的乙醇代谢差异。然而，其他人报告说，DBA(Linsenbardt等人，2009年)或C57BL/6小鼠(Gorin-Meyer等人，2007年；Linsenbardt等人，2009年)的乙醇代谢不存在性别差异。尽管我们无法确定乙醇代谢中的性别差异是否可以解释下文讨论的行为差异，但我们认为它们在此处不太可能起主要作用。由于测定是在大约一个月的间隔内进行的，我们没有直接比较青春期和成年期小鼠。然而，我们发现先前暴露于暴饮乙醇使青春期和成年期小鼠对乙醇的反应比对照组更极端。这可能表明乙醇暴露使系统产生了预处理或致敏作用，并增强了与年龄相适应的行为反应。我们不认为在青春期观察到的敏感性降低仅仅是由于耐受性，因为翻正反射测试是在最后一次乙醇暴饮后4天进行的。
图5 | 成年期乙醇暴露小鼠对乙醇的敏感性更高。(A) 与雄性(每组 只)相比，成年雌性(每组 只)失去翻正反射的潜伏期明显更短。 ，双向方差分析得出的性别主效应。但各治疗组之间无差异。(B) 在成年期，青春期乙醇暴露使成年小鼠的翻正反射消失时间延长。数据表示为平均值±标准误。* ，双向方差分析得出的治疗主效应。
图6 | 青春期暴饮乙醇会改变髓鞘相关基因的mRNA表达。(A) 通过qPCR检测，暴饮乙醇降低了雄性和雌性DBA/2J前额叶皮质中许多髓鞘相关基因的表达，包括Mag、Mbp、Mobp和P/p mRNA( ，双向方差分析得出的治疗与性别的交互作用)。在青春期，DBA/2J雄性小鼠的髓鞘相关mRNA比雌性小鼠更多(* <0.05，双向方差分析得出的性别主效应)。(B) 在成年期，先前的暴饮乙醇并未改变髓鞘相关基因的表达。成年期未发现性别差异。数据表示为平均值±标准误。
图7 | 乙醇暴露的青春期雄性小鼠中H3K36甲基化水平降低。(A) 使用酶联免疫吸附测定法测量前额叶皮质中的整体甲基化水平(每组n = 3 - 4只)，暴饮乙醇降低了DBA雄性小鼠中的H3K36me、H3K36me2和H3K36me3(* <0.05，双向方差分析得出的治疗与性别的交互作用)。(B) 暴饮乙醇对H3K9甲基化(单甲基、二甲基或三甲基)没有显著影响( 组)。数据表示为平均值±标准误。
此外，在我们的模型中，青少年暴饮乙醇可能会促进长期的运动敏化。在最后一次暴饮后测试焦虑 时，暴露于乙醇的小鼠在明暗箱中比对照组走得更远。成年后，在测试乙醇诱导的抗焦虑作用时，给予2 g/kg乙醇的预激发注射，增加了有暴饮乙醇史的雌性小鼠的运动活性。在啮齿动物中，青少年比成年人对低剂量乙醇的运动刺激和运动敏化作用更敏感(Lopez等人，2003年；Hefner和Holmes，2007年；Stevenson等人，2008年)。青春期暴露于乙醇的瑞士小鼠，尤其是高剂量组，与对照组相比具有增强的运动刺激作用，并且这些作用在最后一次乙醇暴露后持续了3周(Quoilin等人，2012年，2014年)。我们在成年动物中的行为研究同样在最后一次青少年灌胃乙醇处理后24天开始。乙醇诱导的运动敏化与乙醇的强化作用有关，并与其成瘾特性相关(Wise和Bozarth，1987年)。虽然我们没有直接测量青少年中乙醇诱导的运动活性的影响，但我们认为暴饮乙醇暴露使小鼠敏感，并且作为青少年，小鼠可能在明暗测试中表现出增加的运动活性。这种早期生活暴露也可能产生了性别特异性的长期乙醇敏化，使得在成年期，低剂量乙醇激发会在雌性动物中引起更大的运动反应(图4C)。未来需要进行研究以直接测试这种效应以及运动敏化的持续性。
在这些研究中使用的剂量下，DBA/2J小鼠没有表现出戒断诱导的焦虑。在最后一次乙醇暴饮后24小时，暴露于乙醇的小鼠和对照小鼠在明暗箱中的基础焦虑相似。其他人报道了青少年大鼠中戒断诱导的焦虑(Pandey等人，2015年；Kyzar等人，2016年)，尽管并非一直如此(Kiefer等人，2003年；Lee等人，20l6年；Morais-Silva等人，2016年)。事实上，一些人认为青少年小鼠对早期乙醇戒断具有抵抗力(Lee等人，2016年)，并且青春期的暴饮乙醇可能仅在大鼠而非小鼠中产生持久的戒断诱导的焦虑。重要的是，如上所述，我们观察到暴露于乙醇的小鼠运动活性增加。运动差异可能会混淆对明暗箱中焦虑表型的解释。此外，对照小鼠仅在明处花费约8 - 10%的时间，这表明明暗箱中焦虑表型存在下限效应。因此，我们缺乏戒断诱导的焦虑这一结果必须谨慎解释。
为了验证青少年暴饮乙醇会破坏前额叶皮质(PFC)信号传导、注意力或记忆力这一假设，我们使用新颖物体识别任务来评估识别记忆。该任务基于天生的新奇寻求行为，因此无需外部动机或奖励，且几乎不需要训练(Antunes和Biala，2012年)。此任务对PFC和嗅周皮质信号传导的破坏很敏感(Seamans等人，1995年)，并且在青少年接触乙醇后会出现记忆缺陷(Montesinos等人，2014年；Beaudet等人，2016年)。成年DBA/2J小鼠在青少年期接触暴饮乙醇后，在识别记忆方面存在缺陷，在短的、由PFC介导的试验间延迟时缺陷更明显(图3)。雌性在较长的、由嗅周皮质介导的延迟时表现出缺陷趋势。结合运动活动来看，这可能表明雌性对青少年乙醇暴露的长期影响可能比雄性更敏感。或者，由于新颖物体识别任务基于新奇寻求行为，花较少时间探究新物体的小鼠可能存在新事物恐惧症。未来需要开展研究来调查暴饮乙醇对新事物恐惧症和/或其他与焦虑相关任务的影响，以探究这种可能性。重要的是，使用不同的乙醇暴露范式和不同的认知任务，其他人报告称，暴露于乙醇的青少年大鼠和小鼠在逆向学习和物体识别方面存在缺陷，这些缺陷会持续到成年期(Coleman等人，2011年、2014年；Vargas等人，2014年；Beaudet等人，2016年)，并且可能与皮质体积变化(Coleman等人，2011年、2014年)和髓鞘超微结构变化(Vargas等人，2014年)有关。髓鞘的变化也与认知和行为表现的细微差异有关(Perrin等人，2008年；Paus，2010年)。此外，新颖物体识别缺陷与Shank3功能丧失以及相关的谷氨酸神经传递减少和长时程增强有关(Yang等人，2012年)。我们的基因组分析表明，在最后一次给予乙醇剂量3周后，DBA/2J小鼠的Shank3表达也降低了，并且额叶皮质中的谷氨酸和AMPA信号可能减少。关于青少年PFC内谷氨酸信号传导的作用，报道较少。最近的一项研究表明，谷氨酸信号传导可能是青少年易患暴饮的基础(Agoglia等人，2015年)。另一项研究报告称，青少年暴饮乙醇后，成年期前边缘皮质的树突棘密度增加，而谷氨酸能蛋白表达没有改变(Trantham-Davidson等人，2017年)然而，在成年啮齿动物和酗酒者中，依赖后大鼠的PFC中谷氨酸信号传导和代谢型谷氨酸受体2(mGluR2)的表达明显下调(Meinhardt等人，2013年)，在人类酗酒者的mPFC死后组织中也是如此(Heilig等人，2017年)。与髓鞘表达减少一起，额叶皮质向其他脑区的谷氨酸能神经传递减少可能是乙醇降低识别记忆的一种机制。
乙醇一再与PFC髓鞘基因表达的改变有关(Lewohl等人，2000年；Liu等人，2004年；Kerns等人，2005年；Wolstenholme等人，2011b；Farris和Miles，2013年)。人类神经影像学研究发现PFC白质变化(De Bellis等人，2005年；Medina等人，2008年；Luciana等人第2013年)，这引发了人们对髓鞘在介导青少年乙醇暴露长期后果中可能作用的日益浓厚兴趣。大鼠在青少年期间歇性接触乙醇会减少胼胝体大小并增加降解的髓鞘(Vargas等人，2014年)。我们还观察到，暴露于暴饮乙醇的青少年小鼠额叶皮质中与髓鞘相关的基因表达减少(图6)。然而，在最后一次给予乙醇剂量3周后的成年期，与髓鞘相关的基因表达差异并未持续存在。由于持续戒酒可部分逆转单纯性酗酒者的白质损失(Shear等人，1994年；Pfefferbaum等人，1995年)，髓鞘表达可能会在停止乙醇暴露后随时间恢复，这是有道理的。正在进行的研究正在评估我们的青少年暴饮模型是否会使髓鞘蛋白表达或结构持续改变至成年期。
我们对基因组数据的生物信息学分析还发现，参与组蛋白去甲基化酶活性的基因，特别是调节H3K9和H3K36甲基化的基因，在暴饮乙醇后的青少年前额叶皮质中显著下调。事实上，在GO:0010452通路(组蛋白H3K36甲基化)的10个基因中有7个，以及在GO:0032454通路(组蛋白去甲基化酶(H3K9特异性))的8个基因中有5个在青少年前额叶皮质中显著减少。由于赖氨酸可以被单甲基化、二甲基化或三甲基化，并且甲基化程度可以不同地影响基因表达，因此解释这些表观遗传修饰的作用很复杂。例如，H3K9me2在转录沉默的常染色质区域富集，而H3K9me3通过形成HP1的结合位点介导异染色质形成，并参与常染色质位点的基因沉默(Lehnertz等人，2003年)。我们分析中鉴定的每种表观遗传酶都特异性催化特定组蛋白上特定氨基酸的修饰，并对该位点的甲基化程度表现出特异性(补充图S1)。最近发现H3K9me3是少突胶质前体细胞(OPC)成熟为形成髓鞘的少突胶质细胞时谷氨酸或GABA突触转录变化的组蛋白标记(Liu等人，2015年)。在OPC中，H3K9me3在神经元谱系的基因、与膜兴奋性调节相关的基因或抑制性蛋白复合物中增加。暴饮乙醇青少年中这种标记的表达降低以及谷氨酸信号传导减少可能表明少突胶质细胞没有成熟为形成髓鞘的细胞，这可能是乙醇发挥其抑制少突胶质细胞分化从而阻碍暴饮青少年前额叶皮质发育作用的一种机制。
另外，H3K36甲基化与活跃转录相关。H3K36me在活跃基因的编码区域富集，而H3K36me2在双链断裂修复中起作用(Jha和Strahl，2014年)。H3K36me3被RNA聚合酶II取代，并作为HDAC结合的标记以防止转录失控(Butler和Dent，2012年)。如在暴饮乙醇后的青少年前额叶皮质中所发现的，这些标记的减少可能会松开RNA聚合酶II的刹车，并增加替代启动子位点的异常、隐蔽转录以及转录失调。
近期关于酒精和其他药物依赖的研究开始确定组蛋白甲基化和其他表观遗传变化在成瘾相关表型中的作用。在青春期大鼠中，间歇性乙醇上调了前额叶皮质(PFC)中的组蛋白乙酰转移酶(HAT)活性和组蛋白乙酰化水平(Pascual等人，2012年)。全身给予HDAC抑制剂可进一步提高PFC的HAT活性，但仅在青少年中有效。成年人不受HDAC抑制的影响，这表明这些表观遗传修饰具有时间分辨率，在发育过程中很重要。在发育中的杏仁核中，HDAC活性和HDAC2水平导致杏仁核中央核(CeA)中组蛋白(H3K9)乙酰化不足，并持续到成年期(Pandey等人，2015年)。
关于组蛋白甲基化在成瘾中的作用，正在形成越来越多的共识。例如，青少年间歇性接触乙醇会增加前额叶皮质中cFos、Cdk5和FosB启动子区域的H3K4me2(Pascual等人，2012年)。在依赖大鼠的前额叶皮质中，H3K9me1和负责H3K9单甲基化的酶Prdm2减少(Barbier等人，2016年)。在前额叶皮质中，病毒载体介导的非依赖大鼠Prdm2减少，即使在存在奎宁掺假的情况下，也会增加乙醇摄入，表现出酒精依赖的表型特征。此外，反复接触可卡因或吗啡后，伏隔核中的H3K9me2减少(Sun等人，2012年)，但急性接触可卡因后H3K9me3上调(Maze等人，2010年)，戒断时减少。组蛋白甲基转移酶G9a可能参与可卡因诱导的可塑性和吗啡相关行为(Maze等人，2010年；Sun等人，2012年)，进一步表明组蛋白甲基化也可能与成瘾有关。需要进一步研究来确定这些修饰在我们模型中起作用的具体位点，以及它们在乙醇敏感性长期表达和认知衰退中的作用。
表观遗传标记以及添加或去除这些修饰的酶在整个发育过程中的表达会发生波动。我们假设，在关键发育时期，如青春期，乙醇诱导的组蛋白甲基化扰动可能会导致广泛的基因失调，就像我们在此处的研究中看到的髓磷脂和谷氨酸信号相关基因表达那样。这种反应可能会影响正常的发育轨迹，并导致成年期乙醇行为病理学的持续存在和/或出现。未来的研究将试图将离散的表观遗传修饰与青少年乙醇暴露导致的特定基因表达和行为后遗症建立因果联系。
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作者贡献
该研究由JW构思、设计、执行、分析并撰写。qPCR研究由TM进行。GH和SA调整了S评分算法，使其适用于MTA 1.0微阵列。MM提供了资源、实验解读并对手稿进行了严格审查。
资金资助
本研究由美国国立酒精滥用与酒精中毒研究所(NIAAA)授予MM的U01AA016667、P50AA022537和R01AA020634基金以及弗吉尼亚联邦大学临床与转化研究中心授予JW的基金提供资金支持。
致谢
作者们感谢Milton Faison博士对稿件进行严格审读和编辑。
补充材料
本文的补充材料可在以下网址在线获取:http://journal.frontiersin.org/article/10.3389/fnmol.2017.00307/full#supplementary-material
图S1 | 青春期小鼠暴饮乙醇改变的新型基因网络。通过Ingenuity Pathway Analysis生成的两个新型基因网络鉴定出参与组蛋白甲基化的基因。该表反映了基因本体分析中的基因，即使用 评分分析发现的、经暴饮乙醇显著改变的GO: 0032454组蛋白去甲基酶活性(H3-K9特异性)或GO:0010452组蛋白H3-K36甲基化相关基因。
图S2 | 暴饮乙醇改变并在成年期持续改变的新型基因网络。通过Ingenuity Pathway Analysis对青春期暴饮乙醇持续改变的基因生成的代表性新型基因网络。该网络富含参与AMPA受体信号传导的基因。
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